[发明专利]草莓连作障碍酚酸类物质提取、分离纯化的方法

说明书

本发明提供一种草莓连作障碍酚酸类物质提取、分离纯化的方法，以草莓连作后的根际鲜土壤为提取、分离纯化原料，经过除杂、过筛，加碱离心静置，酸化处理。精密过滤制分离提取样品液、最后采用高效液相色谱法进行草莓连作障碍酚酸类物质提取、分离纯化方法简单，对草莓连作过程中土壤的毒性分析状况有着重要的意义。

技术领域：

本发明涉及农业生产领域，一种草莓连作障碍物质提取、分离纯化的方法，特别是一种草莓连作障碍酚酸类物质提取、分离纯化的方法。

背景技术：

草莓连作障碍严重的阻碍了草莓的可持续化的生产与发展，草莓连作障碍的主要原因是根系产生的自毒作用,而酚酸类物质是草莓连作障碍的主要类物质。

草莓根际土壤的酚、酸类物质，主要有苯环、含羟基和羧酸极性基团的有机致毒物质，有对羟基苯甲酸、肉桂酸、阔马酸、4-羟基苯甲酸、香草酸、棕榈酸、苯二羧酸、4-香豆酸、阿魏酸、丁香酸、DL-扁桃酸、L-苯丙氨酸、2，4-丁基苯酚、苯甲醇、邻苯二甲酸、太酸二丁酯、苯甲醛，二苯基砜、乙二酸双酯、邻苯二酸二异辛酯、硬脂酸甲酯、壬醛二甲缩醛、棕榈酸甲酯等。但大部分有苯环、含羟基和羧酸极性基团的有机致毒物质含量极低，无法定量分析。而仅有含量相对较高的没食子酸、原茶儿酸、对羟基苯甲酸、咖啡酸、丁香酸和对香豆酸等少数的能够定量的分析检测，而这些物质也正是草莓连作过程中其根际土壤中自毒性的主要的酚、酸类物质。

不同连作年限的草莓根际的土壤中酚酸含量变化显著，其中没食子酸随连作年限明显增加，原茶儿酸、对羟基苯甲酸、咖啡酸、丁香酸和对香豆酸呈先降低后升高趋势。有研究表明，随连作年限的增加，土壤总酚酸含量总体呈显著增加趋势，连作３年后土壤中酚酸物质的总浓度达到36.291mg·kg^-1，与未连作时土壤中酚酸物质的总浓度26.462 mg·kg^-1相比增长37%。

因此，如何来对草莓连作根际土壤中的障碍酚酸类物质进行提取与分离纯化，对草莓连作过程中土壤的毒性分析有着重要的意义。

发明内容：

本发明提供一种草莓连作障碍酚酸类物质提取、分离纯化的方法，以草莓连作后的根际鲜土壤为提取、分离纯化原料，经过除杂、过筛，加碱离心静置，酸化处理。精密过滤制分离提取样品液、最后采用高效液相色谱法进行草莓连作障碍酚酸类物质提取、分离纯化方法简单。

本发明公开一种草莓连作障碍酚酸类物质提取、分离纯化的方法，以草莓连作后的根际鲜土壤为提取、分离纯化原料，其包括如下步骤：

1）、除杂、过筛，将提取的草莓连作后的根际鲜土壤原料，经剔除根茬残体及其余杂物质，经粉碎、过筛，为除杂土；

2）、加碱离心静置，将1）步制备的除杂土置于离心装置中，并加入碱水溶液，并离心搅拌静置，得上清液为静置碱性溶液；

3）、酸化处理，将2）步制得的静置碱性溶液先进行震荡处理、然后加入酸溶液进行酸化处理，至溶液pH为2-3.5，得酸化处理液；

4）、精密过滤制分离提取样品液、将3）步制得的酸化处理液，用精密过滤器过滤制得分离提取样品液；

5）、将4）步制备的分离提取样品液使用液相柱采用高效液相色谱法进行草莓连作障碍酚酸类物质提取、分离纯化，测得到草莓连作障碍酚酸类物质。

所述的一种草莓连作障碍酚酸类物质提取、分离纯化的方法，其步骤1)所述过筛是过30-50目筛。

所述的一种草莓连作障碍酚酸类物质提取、分离纯化的方法，优选的，是其步骤2）加入碱水溶液是加NaOH溶液，控制NaOH溶液的浓度为0.8-1.5 mol·L^-1；所述静置是控制静置时间为20-30小时。