[发明专利]一种高活性粪菌胶囊的制备方法

权利要求书

1.一种高活性粪菌胶囊的制备方法，其特征在于：高活性粪菌在耐酸性肠溶性胶囊的保护下可以到达患者肠道发挥作用，包括如下步骤：

S1、粪菌液的制备；

S2、粪菌液活性及菌群结构评估；

S3、将步骤S2中所得粪菌液加入冻干保护剂冻存至给患者进行粪菌胶囊移植前，在对受体进行粪菌胶囊移植时，将粪菌液解冻，并离心得到菌体；

S4、将步骤S3中的菌体用适当体积的粪菌溶剂进行溶解，将粪菌菌体装入双层耐酸性肠溶性胶囊中。

2.根据权利要求1所述的一种高活性粪菌胶囊的制备方法，其特征在于，步骤S1中，粪菌液的制备方法为：

S10、仪器准备：将装有供体捐赠粪便的分离罐用带有螺旋叶片搅拌杆的盖子密闭，将搅拌杆连接到特制的粪便分离机器中；将5个无菌密闭的过滤罐连接依次排放安装到分离机中，起始罐用导管与分离罐相连，末尾罐与收集罐相连，形成一个由搅拌、过滤、收集的完整的密闭系统；分离设备，安全柜使用前紫外灭菌30min；

S11、启动机器：用加注泵将500ml的0.9％的生理盐水加注到分离罐中，开启搅拌机1000rpm，5min，再注入生理盐500ml，搅拌1000rpm，5min；此过程将粪便与生理盐水完全混合，使肠菌游离在生理盐水中，再开启过滤系统，搅拌的菌液经过5个过滤罐的过滤，将体积较大的食物残渣滤过后，收集到收集罐中；

S12、菌体洗涤：将收集罐中的肠菌分装到2个高压灭菌的ThermoFisher的离心罐中，配平，将分离到的菌液以4000-6000rpm离心3min，肠菌由于重力作用将沉淀在管底，去上清，每离心罐加100ml生理盐水震荡重悬，再以4000-6000rpm离心3min，去上清；

S13、去皮称重：每管加生理盐水20ml加20ml灭菌的50％甘油，最后分成4管或2管，每管40ml，菌量为10-20g；然后在这2-4管中各取1ml至3个无菌的冻存管中，登记捐献者姓名，并置于-80℃冰箱冻存，待流式细胞计数及高通量16S测序所用。

3.根据权利要求2所述的一种高活性粪菌胶囊的制备方法，其特征在于，步骤S10中，100-200g粪便样本加入750-1000ml无菌生理盐水进行溶解。

4.根据权利要求1所述的一种高活性粪菌胶囊的制备方法，其特征在于，步骤S2中，粪菌液活性及菌群结构评估中，利用流式细胞计数来分析冻存过程中活菌的比例，利用16SrDNA测序分析来评估冻存过程中的菌群组成与结构，具体步骤如：

S21、冻存粪菌在37℃水浴锅中解冻；

S22、冻存粪菌的稀释、流式细胞染色及计数观察；

S23、冻存粪菌的DNA提取及16S rDNA测序分析。

5.根据权利要求1所述的一种高活性粪菌胶囊的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述冻干保护剂冻为50％的甘油及0.9％NaCl。

6.根据权利要求1所述的一种高活性粪菌胶囊的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述粪菌溶剂为98-100％的橄榄油。