[发明专利]一种游动球菌耐盐碱基因mceT及其鉴定方法有效
| 申请号： | 201910048713.8 | 申请日： | 2019-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN109628474B | 公开（公告）日： | 2021-02-09 |
| 发明（设计）人： | 姜巨全;徐桐;邵丽;孟琳;张瑞;张正来;洪闪;邹俏;郑秀桃;郭思伽;王玉婷 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C07K14/195;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 成都东恒知盛知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 51304 | 代理人： | 何健雄 |
| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 游动 球菌 盐碱 基因 mcet 及其 鉴定 方法 | ||
1.一种游动球菌耐盐碱基因mceT，其特征在于，所述的游动球菌耐盐碱基因mceT，是一个921bp的完整开放阅读框ORF，ORF的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。
2.一种利用权利要求1所述游动球菌耐盐碱基因mceT编码的蛋白，其特征在于，所述的蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.2。
3.一种如权利要求1所述游动球菌耐盐碱基因mceT的鉴定方法，其特征在于，所述游动球菌耐盐碱基因mceT的鉴定方法包括以下步骤：
(1)通过基因文库与基因功能互补相结合的筛选技术，从保藏编号CGMCC1.12151的游动球菌中获得含有耐盐碱相关的基因片段，所述的耐盐碱相关的基因片段是一个长921bp的mceT基因的完整开放阅读框ORF，ORF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1；
(2)构建含有游动球菌耐盐碱基因mceT基因的原核表达载体；
(3)通过转化异源宿主
4.一种利用权利要求1所述游动球菌耐盐碱基因mceT构建的原核表达载体，其特征在于，所述原核表达载体为pTrcHisB-mceT。
5.一种如权利要求4所述原核表达载体的构建方法，其特征在于，所述原核表达载体pTrcHisB-mceT的构建方法包括：
根据mceT基因序列，首先设计引物，并在基因的5’和3’端分别引入BamHI和HindIII两个酶切位点，然后进行mceT基因的PCR扩增，对mceT基因进行亚克隆；
将PCR扩增产物酶切纯化后连接到表达载体pTrcHisB上，转化到KNabc感受态细胞中，将转化产物进行蓝白斑筛选；对得到的转化子进行测序。
6.一种权利要求2所述蛋白的突变体，其特征在于，所述蛋白的突变体只具有促进Zn2+吸收能力，所述突变为Q150A、S158A。
7.一种权利要求2所述蛋白的突变体，其特征在于，所述蛋白的突变体只具有耐盐功能，所述突变为D41A、D154A。
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