[发明专利]一种游动球菌耐盐碱基因mceT及其鉴定方法

说明书

本发明属于基因工程技术领域，公开了一种游动球菌耐盐碱基因mceT及其鉴定方法，耐盐碱基因mceT，含一个921bp的完整开放阅读框ORF；从德昌游动球菌中获得含有耐盐碱相关的基因片段；构建含有游动球菌耐盐碱基因mceT基因的原核表达载体；通过化转异源宿主将携带基因mceT的质粒电击转化的方法导入至KNabc宿主中，对基因mceT生理功能及编码的蛋白活性进行鉴定。本发明能够抑制一株Zn²⁺敏感型大肠杆菌突变株在含0.75mM ZnCl₂的培养基中的生长。并且构建了MceT蛋白的多种突变体，使其只能行使耐盐碱或促进Zn²⁺向细胞内扩散的其中一种功能。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种游动球菌耐盐碱基因mceT及其鉴定方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：

目前认为实现盐碱地土壤改良需要多学科共同攻关才能得以完成。从生物学角度，主要的方法则是从微生物和植物同时入手，高效耐盐微生物与植物协同作用。现有表明固氮菌、根瘤菌等微生物肥料的施用与化学肥料相比，在促进高效耐盐碱植物改良盐碱地土壤方面，效果更加明显。但很多植物无法直接获得盐碱地贫瘠的碳氮源，且只施用化学肥料则会造成更严重的环境灾难。

可用于土壤改良的微生物肥料和植物却不具有抵抗高盐碱的能力，这成了目前技术的难题。因此，除了发掘高效耐盐碱的微生物和植物资源以外，规模化地发掘高效耐盐碱的新功能基因用以构建相应基因工程菌株微生物肥料和转基因植物显得尤为重要。

Na⁺/H⁺逆向转运蛋白是能够利用跨膜质子梯度势将细胞内Na⁺排出到细胞外的一类次级转运蛋白，是生物维持体内Na⁺和pH稳态的主要蛋白。由于Na⁺/H⁺逆向转运蛋白同时具有Li⁺/H⁺逆向转运蛋白活性，它们也被称为Na⁺(Li⁺)/H⁺逆向转运蛋白。其中有些报道显示出同时具有K⁺/H⁺逆向转运蛋白。根据其蛋白结构的不同，Na⁺/H⁺逆向转运蛋白分为NhaA、NhaB、NhaC、NhaD、NhaE、CPA1、CPA2、CPA3和DHA1这9大家族。其中除CPA3家族由多个基因组成以外，其余都是单个基因编码的蛋白。Na⁺/H⁺逆向转运蛋白是微生物以及植物抵抗盐碱胁迫的一类重要蛋白，但是目前已知的的Na⁺/H⁺逆向转运蛋白种类有限，功能单一，且应用较少。

综上所述，现有技术存在的问题是：

现有技术中很多根际促生微生物和植物无法直接在盐碱地土壤上正常生长，且物理化学方法对土壤改造存在着环境污染的潜在问题。

现有技术中Na⁺/H⁺逆向转运蛋白是微生物以及植物抵抗盐碱胁迫的一类重要蛋白，目前已知的的Na⁺/H⁺逆向转运蛋白种类有限，功能单一，且应用较少。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种游动球菌耐盐碱基因mceT及其鉴定方法。

本发明是这样实现的，一种游动球菌耐盐碱基因mceT，所述的游动球菌耐盐碱基因mceT，含一个921bp的完整开放阅读框ORF，ORF的核苷酸序列为SEQIDNO.1。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述游动球菌耐盐碱基因mceT编码的蛋白，所述的蛋白氨基酸序列为SEQIDNO.2。