[发明专利]拟南芥FIPV启动子融合GUS基因的表达载体构建方法

权利要求书

1.一种拟南芥FIPV启动子融合GUS基因的表达载体构建方法，包括拟南芥FIPV基因启动子的DNA序列如序列表中拟南芥Col-0FIPV基因启动子序列，其特征在于，拟南芥FIPV基因启动子的克隆方法如下：

1)以拟南芥Col-01周大的植株为材料，采用CTAB法提取其gDNA，设计特异性引物(F和R)扩增FIPV基因启动子：

F(正向引物)：5’-CGGGGTACCATTCTTCGGTTTTCCGGT-3’；

R(反向引物)：5’-CCGCTCGAGACCGGAAAACCGAAGAAT-3’；

2)以提取的gDNA为模板，设计的F和R为引物，进行PCR反应，产物凝胶回收后通过酶切连接入Gateway兼容的载体pENTR3C，构建克隆载体pENTR FIPV-Promoter，然后将pENTRFIPV-Promoter与包含GUS报告基因的载体pMDC162进行LR反应，得到包含FIPV-Promoter融合GUS的表达载体pMDC FIPV-Promoter-GUS，该表达载体转化感受态大肠杆菌DH5α，对pMDCFIPV-Promoter-GUS序列测定后得到拟南芥FIPV基因启动子序列所示:

2.根据权利要求1所述的拟南芥FIPV启动子融合GUS基因的表达载体构建方法,其特征在于，用限制性内切酶Kpn I和Xho I分别对PCR产物和Gateway兼容的载体pENTR3C进行双酶切，将得到的含有黏性末端的FIPV Promoter连接入酶切开的pENTR3C构建克隆载体pENTR FIPV-Promoter。然后将pENTR FIPV-Promoter与包含GUS报告基因的载体pMDC162进行LR反应，得到包含FIPV-Promoter融合GUS的表达载体pMDC FIPV-Promoter-GUS。

3.根据权利要求1所述的拟南芥FIPV启动子融合GUS基因的表达载体构建方法,其特征在于，所用的拟南芥为Col-0。

4.根据权利要求1所述的拟南芥FIPV启动子融合GUS基因的表达载体构建方法,其特征在于，首次克隆到了拟南芥FIPV基因的启动子序列，具体序列如下：

ATTCTTCGGTTTTCCGGTGAGAACGAGCTTCCCAGAACCAGAACCCTAAACACAGAACCTTTCTTAGTTTTCCGGTGAAAGAATCTGAAGATGCTTTTGTTTATTGCAACCTGGTTTGTCTTTTGGTTCGATGAAAGTACAAAAAAAGAGTTTATTTACATTTTTGTTAATATTAATTTTTACTTTTTCACTAATCCTAATTGGGGTAGAAAAAAAAAGGGGTAAATAAGTGTATAAATAAGACCCTAGCGATGATAAAAAGAAGCCGAGACTTGTTGAGAAGAAGCCCTTAAAGCTTCACCGTCTCTCTCTCTCTCTTTCTCGTGAGCTTCAATTCGAATCGGCCGTTCTTCTTCTTCTTCCTCCAATCTCTTTACTCCA。