[发明专利]一种托莫西汀中间体的酶催化合成方法有效
| 申请号： | 201910054868.2 | 申请日： | 2019-01-21 |
| 公开（公告）号： | CN109706191B | 公开（公告）日： | 2022-09-09 |
| 发明（设计）人： | 陈本顺;江涛;何伟;毛玲妙 | 申请（专利权）人： | 南京欧信医药技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P7/22 | 分类号： | C12P7/22 |
| 代理公司： | 南京思拓知识产权代理事务所(普通合伙) 32288 | 代理人： | 吕鹏涛 |
| 地址： | 210046 江苏省南京*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 托莫西汀 中间体 催化 合成 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种托莫西汀中间体的酶催化合成方法，其特征在于，具体步骤如下：
于 250ml 反应器中，加入55ml浓度为0.1mM、pH 为7.0的PB 缓冲液，依次溶解800mg酮羰基还原酶，200mg 异丙醇脱氢酶酶粉，15mgNADP+/NADPH；1g 底物1-苯基-3-丁烯-1-酮溶于45ml 异丙醇中，加入反应器，600rpm 搅拌，于25℃下反应24h，得到(S)-1-苯基-3-丁烯-1-醇；反应结果经HPLC 检测，转化率95.9%，ee值99.8%；
所述的酮羰基还原酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1 所示；所述的酮羰基还原酶通过酮羰基还原酶表达工程菌发酵制得，具体步骤为：将酮羰基还原酶的合成基因导入pet-28a(+)的Hind Ⅲ和EcoRⅠ酶切位点得到重组表达质粒，再将重组表达质粒转入E.coli DH5α感受态，挑取阳性转化子并测序鉴定后，得到重组表达载体，最后将重组表达载体转入E.coliBL21 中，得到酮羰基还原酶表达工程菌，发酵培养，离心收集菌体，洗涤并重悬，超声破碎，冻干得到酮羰基还原酶。
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