[发明专利]一种抗人CAIX抗原的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明提供一种抗人CAIX抗原的嵌合抗原受体及其应用；所述嵌合型抗原受体由识别人CAIX抗原的scFv、铰链区、跨膜区和胞内信号结构域依次串联组成，通过杂交瘤抗体筛选系统筛选得到新的抗人CAIX的scFv，将该scFv与人CD8的Hinge和跨膜区、4‑1BB和CD3ζ的胞内信号结构域串联构建新的嵌合抗原受体scFv‑CD8‑4‑1BB‑CD3ζ，具有更高的特异性和更好的肿瘤杀伤效果。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种抗人CAIX抗原的嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

杂交瘤技术，即淋巴细胞杂交瘤技术，又称单克隆抗体技术。它是在体细胞融合技术基础上发展起来的。1975年，克勒(Kohler)和米尔斯坦(Milstein)证明小鼠骨髓瘤细胞与免疫的小鼠脾细胞融合，形成能分泌针对该抗原的均质的高特异性的抗体—单克隆抗体，这种技术称为杂交瘤技术。这一技术的基础是细胞融合技术。骨髓瘤细胞在体外可以连续传代，而脾细胞是终末细胞，不能在体外繁殖。如将小鼠的骨髓瘤细胞与分泌某种抗体的淋巴细胞融合，则融合细胞既具有肿瘤细胞无限繁殖的特性，又具有淋巴细胞能分泌特异性抗体的能力。经过对融合细胞的筛选可以获得分泌针对免疫抗原的单克隆细胞株，通过基因工程手段可以测序获得该抗体的重链可变区(Hv)和轻链(Lv)可变区编码序列，通过linker连接可拼接为scFv序列。

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)修饰的T细胞疗法是目前最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。嵌合抗原受体是模拟T细胞受体(T cellreceptor，TCR)功能的人工受体，由抗原识别区、胞外铰链区、跨膜区以及胞内信号转导区组成。CAR修饰的T淋巴细胞能够通过其抗原识别区识别肿瘤细胞表面抗原，然后通过胞外铰链区和跨膜区将识别信号传递给胞内信号区激活T淋巴细胞的杀伤活性，杀死肿瘤细胞。根据胞内信号转导区含有共刺激分子的不同，CAR被划分为三代。第一代CAR的胞内信号转导区仅含有CD3ζ的胞内信号结构域，没有共刺激分子信号。第二代CAR的胞内信号转导区除含有CD3ζ的胞内信号结构域外，还含有一个共刺激分子通常为CD28或4-1BB。第三代CAR的胞内信号转导区除含有CD3ζ的胞内信号结构域外，还含有两个共刺激分子通常为CD28和4-1BB。

目前CAR-T技术治疗肿瘤已经开展了大量的临床试验，其中抗CD19的CAR-T细胞治疗恶性血液病的效果尤其显著，据此美国FDA已经批准了两个产品上市。CAR-T技术在血液肿瘤治疗上的成功给实体瘤的治疗也带来了希望。以GD2为靶点的CAR-T治疗神经母细胞瘤或者的临床试验已经取得了可观的疗效，部分患者被完全治愈。

CAIX是一种在肾癌细胞高表达的跨膜糖蛋白，也是目前所知唯一的肾癌特异性抗原。目前国际上注册以CAIX为靶点治疗肾癌的临床试验21项，已完成10项，包括Lamers等完成的针对CAIX的CAR-T细胞治疗肾癌研究。早在1996年Weijtens等构建由鼠抗人CAIX的scFv与FcRγ串联而成的CAR(scFv-FcRγ)。2013年Lamers等报道该CAR-T细胞治疗肾癌的I/II期临床试验，遗憾的是受试的12名肾癌患者均未观察到临床客观疗效。

因此，提供一种新的能提高对肾癌细胞的杀伤作用的抗人CAIX抗原的嵌合抗原受体，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

发明内容

针对现有技术的不足及实际的需求，本发明提供一种抗人CAIX抗原的嵌合抗原受体及其应用，所述嵌合型抗原受体由识别人CAIX抗原的scFv、铰链区、跨膜区和胞内信号结构域依次串联组成，具有更高的特异性和更好的肿瘤杀伤效果。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种抗人CAIX抗原的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体由识别人CAIX抗原的单链抗体scFv、铰链区、跨膜区和胞内信号结构域依次串联组成；

其中，所述识别人CAIX抗原的单链抗体scFv的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。