[发明专利]一种手足口EV71抗原检测试剂盒

说明书

本发明适用于体外诊断试剂技术领域，提供了一种手足口EV71抗原检测试剂盒。所述手足口EV71抗原检测试剂盒，包括包被有抗EV71‑VP1单克隆抗体的酶标板、HRP标记的检测用抗EV71单克隆抗体、企业参考品、样本稀释液、浓缩洗涤液、显色液A、显色液B、终止液。本发明的手足口EV71抗原检测试剂盒采用特异的抗原表达序列SEQ ID NO：1，用来检测血清中的EV71抗原，可有效提高检测灵敏度，用于手足口病EV71感染临床病人早期辅助诊断；试剂盒中包含的企业参考品能够用于企业生产EV71抗原检测试剂盒的质量控制，能够很好的控制试剂盒的产品质量。

技术领域

本发明属于体外诊断试剂技术领域，尤其涉及一种手足口EV71抗原检测试剂盒。

背景技术

手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒感染引起的手、足皮肤及口腔黏膜疱疹为主要症状的传染性疾病。引起手足口病的肠道病毒包括肠道病毒71型(EV71)和A组柯萨奇病毒(CoxA)、埃可病毒(Echo)的某些血清型。EV71感染引起重症病例的比例较大。肠道病毒传染性强，易引起暴发或流行。

目前手足口病的相关诊断主要通过临床诊断和试验室诊断两大类。其中手足口病相关的临床诊断方面：急性起病，发热，手掌或脚掌部出现斑丘疹和疱疹，臀部或膝盖也可出现皮疹。皮疹周围有炎性红晕，疱内液体较少；口腔粘膜出现散在的疱疹，疼痛明显。部分患儿可伴有咳嗽、流涕、食欲不振、恶心、呕吐和头疼等症状。重症病例表现为：1.有手足口病的临床表现的患者，同时伴有肌阵挛，或脑炎、急性迟缓性麻痹、心肺衰竭、肺水肿等。2.手足口病流行地区的婴幼儿虽无手足口病典型表现，但有发热伴肌阵挛，或脑炎、急性迟缓性麻痹、心肺衰竭、肺水肿等。目前手足口病的实验室诊断主要包括病毒分离、核酸检测、血清学检测等方法；(1)病毒分离，自咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子、脑脊液或疱疹液、以及脑、肺、脾、淋巴结等组织标本中分离到肠道病毒。(2)核酸检测：自病人血清、咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子、脑脊液或疱疹液以及脑、肺、脾、淋巴结等组织标本等标本中检测到病原核酸。(3)血清学检测：病人血清中特异性IgM抗体阳性，或急性期与恢复期血清IgG抗体有4倍以上的升高。目前尚无批准的抗原检测试剂。

引起手足口病的人肠道病毒根据其基因亲缘性关系可以分为4个组(A组、B组、C组和D组肠道病毒)，其中A组肠道病毒目前已知包括17个血清型，分别是柯萨奇A组病毒2～8、10、12、14和16型新肠道病毒71、76、89～92型。引起HFMD的最主要的病原体是A组肠道病毒中的EV71和柯萨奇病毒A组16型。肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染在临床上主要感染对象为5岁以下的幼儿。成年人亦可感染，并在同一家庭成员内部传播，但临床症状不明显。这种亚临床感染或隐性感染也是EV71快速传播的又一个重要途径。

EV71病毒为小RNA病毒科肠道病毒属，病毒基因组为单股正链RNA，编码VP1、VP2、VP3、VP4四个病毒衣壳蛋白，除VP4包埋在病毒粒子外壳的内侧与病毒核心紧密连接以外，其它3种结构蛋白均暴露在病毒颗粒的表面，抗原决定簇基本上位于VP1～VP3上，Shih等曾用EV71的VP1基因的原核表达产物作为抗原，以间接酶联法建立了相应的EV71-IgM检测试剂，初步证实重组蛋白VP1抗原在制备EV71-ELISA诊断试剂的重要地位。

EV71的早期诊断对后期疾病的防治工作意义重大。尽管RNA检测已经研制成功，该方法操作复杂，且价格昂贵，难以在基层推广应用。同时由于EV71隐性感染的存在，仅凭RNA阳性往往不能确定患者是否为近期发病。相比之下，酶联检测简单、低廉，且EV71IgM是急性感染的重要标记物，具有更广泛的应用价值。目前，商品化EV71IgM检测试剂中所采用的抗原均为灭活的EV71全病毒颗粒，能在发病的第二天即可检测出IgM抗体的存在。但以重组抗原为基础研制试剂，通过工艺及方法学的优化，完全可达到灭活EV71全病毒颗粒抗原的性能，而在生产及操作等方面具有明显的优势。