[发明专利]一种脂肪酶在拆分N-乙酰-DL-甲硫氨酸甲酯中的应用

权利要求书

1.一种脂肪酶在拆分N-乙酰-DL-甲硫氨酸甲酯中的应用，其特征在于所述脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述脂肪酶编码基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：以含脂肪酶编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体冻干粉为催化剂，以N-乙酰-DL-甲硫氨酸甲酯为底物，以pH 7.0缓冲液为反应介质，在25-45℃、600-800rpm条件下进行拆分反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得N-乙酰-L-甲硫氨酸甲酯。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述催化剂用量以缓冲液体积计为10g/L，所述底物终浓度以缓冲液体积计为5-20g/L。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于反应时间为2-60min。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述反应条件为35℃、800rpm反应10min。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述缓冲液为pH 7.0、0.2 mM的Na₂HPO₄/NaH₂PO₄缓冲溶液。

8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：将含脂肪酶编码基因的工程菌接种在LB培养基中，37℃培养OD₆₀₀至0.4-0.6，加IPTG至终浓度0.02 mM，30℃培养10-12 h，菌液8000 rpm，4℃离心10min，收集菌体，再用PBS缓冲液洗涤菌体2次，8000rpm，4℃离心10min，收集湿菌体，冻干，得到湿菌体冻干粉。

9.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述反应液分离纯化的方法为：反应结束后，反应液用4 mM HCl酸化至pH 2.0，然后用等体积乙酸乙酯萃取，分液漏斗分离出有机相，再经纯水洗涤两次，饱和NaCl洗涤两次，将洗涤后得到的有机相用无水硫酸镁进行干燥，除去水后，再将有机相旋蒸至干，得到产物N-乙酰-L-甲硫氨酸甲酯。