[发明专利]一种基于PDL1/PDL2超增强子的免疫检测点抑制剂的应用

说明书

本发明提供一种基于PDL1/PDL2超增强子的免疫检测点抑制剂的应用，用于抑制细胞表面PDL1和PDL2的mRNA表达和蛋白表达。本发明通过基因编辑技术，或抑制使超增强子PDL1L2‑SE激活的信号通路，使肿瘤细胞无法高表达PDL1和PDL2，从而使肿瘤细胞无法产生免疫逃逸，激发机体的肿瘤特异性免疫反应，增加疗效的同时，降低副作用。本发明可以和免疫检测点抑制剂联合应用，减少PDL1或PD1抗体的用量，增加疗效和减少副作用。本发明也可以和化疗联用，增加疗效降低副作用。本发明还可以和放射疗法联用，增加疗效，降低副作用。

技术领域

本发明属于医疗研究技术领域，具体涉及一种基于PDL1/PDL2超增强子的免疫检测点抑制剂的应用。

背景技术

肿瘤细胞为了能够生长，必须逃逸免疫系统的监视，为了实现这个过程，肿瘤细胞表面表达多种能够逃过免疫细胞识别或是抑制免疫细胞功能的分子。PDL1和PDL2是PD-1的配体，PD-L1和PD-L2通过和免疫细胞主要是T细胞表面的PD-1结合，来抑制T细胞的功能，导致免疫系统无法有效清除肿瘤细胞。为了实现肿瘤细胞表面PDL1和PDL2的高表达，肿瘤细胞发展了多种途径，如蛋白稳定、RNA稳定等。具体上，肿瘤细胞如何实现PDL1、PDL2或PDL1和PDL2同时高表达的机制还没有完全理解清楚，由于肿瘤的发生、发展和PDL1及PDL2的表达程度密切相关，因此肿瘤细胞能否大量诱导PDL1和PDL2的表达，将决定其能否发生和进一步的发展。通过抑制PD1、PDL1和PDL2的功能，可以增强免疫系统的功能，实现清除肿瘤细胞的目的，这也是现在临床治疗肿瘤最有效和热门的方法，免疫检测点抑制剂(PD-1受体及其配体PDL1或PDL2是免疫检测点的重要分子之一)。目前临床的肿瘤治疗，主要是针对PD-1或PDL1，肿瘤细胞中PDL1的表达，决定了病人对免疫检测点抑制剂的疗效。

但是，免疫检测点抑制剂由于是广谱地激活免疫系统，往往会导致免疫相关副作用的发生，特别严重的病人可能会发生心肌炎而死亡。因此，能否寻找到肿瘤细胞内特异的PDL1和PDL2激活机制，将有助于我们开发肿瘤特异的治疗策略，使肿瘤病人体内的免疫系统能特异地激活，产生肿瘤特异性免疫，从而避免免疫相关副作用的产生。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种基于PDL1/PDL2超增强子的免疫检测点抑制剂的应用，抑制细胞表面PDL1和PDL2的高表达，减少PDL1或PD1抗体的用量，增加疗效和减少副作用。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种基于PDL1/PDL2超增强子的免疫检测点抑制剂的应用，用于抑制细胞表面PDL1和PDL2的高表达。

其中，所述的基于PDL1/PDL2超增强子的免疫检测点抑制剂用于抑制细胞表面PDL1和PDL2的mRNA表达和蛋白表达。

其中，所述的基于PDL1/PDL2超增强子的免疫检测点抑制剂的应用，包括如下过程：

(1)PDL1/PDL2超增强子使细胞表面PDL1和PDL2高表达的验证

在基因水平上，通过实时定量PCR技术检测HBL、SU-DHL-2、SUM159、RaJi、SU-DHL-10、B-16、U266细胞内PDL1及PDL2的拷贝数，发现SUM159细胞较其他细胞系高表达PDL1及PDL2；

(1-1)实时定量PCR步骤：

(1-1-1)提取RNA：

1、收集HBL、SU-DHL-2、SUM159、RaJi、SU-DHL-10、B-16、U266细胞；

2、各加1ml Trizol裂解细胞；

3、各加0.2ml氯仿，4℃下12000rpm离心15分钟分离两相；

4、提取水相层，加入等体积异丙醇，4℃下12000rpm离心15分钟沉淀RNA；