[发明专利]一种免标记荧光检测基因的方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种免标记荧光检测基因的方法及试剂盒。本发明以底物探针SP结合核酸探针FS辅助目标信号级联再循环扩增策略。以G‑quadruplex为信号报告分子，可现实免标记检测基因，简化了操作，降低了成本。整个检测过程响应迅速，无需专业训练即可掌握操作流程，便于快速推广使用。本发明所述的检测方法和试剂盒，检测度灵敏高，检测限低，精密度高，特异性高。

技术领域

本发明属于分析检测领域，具体涉及一种免标记荧光检测基因的方法及试剂盒。

背景技术

微生物、病毒的基因检测是常见的鉴定方法，在疾病诊断、微生物鉴定、检验检疫等方面有着非常广泛的应用，具有非常重要的意义。

传统的基因检测方法有聚合酶链式反应，酶联免疫吸附和免疫印迹等方法。这些方法需要分离富集、操作繁琐和费时，不利于快速现场检测。近年来，利用生物传感器检测病毒的方法备受关注，已建立荧光、电化学以及比色法等分析技术，但大多需要进行标记，因而限制了这些技术的广泛应用。

开发出一种检测过程快速、操作简单、免标记和灵敏度高，从而降低成本，易于推广具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种免标记荧光检测基因的方法及试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

一种免标记荧光检测基因的试剂盒，包括反应缓冲液、与G-quadruplex结合后荧光发生变化的荧光染料，还包括核酸探针LS、SS、HS和FS，其中：

核酸探针LS从5'端开始依次为I、Ⅱ和Ⅲ区域，其中I区包含链置换反应的支点序列，能通过碱基互补识别待测基因；Ⅱ区与HS核酸探针完全互补；Ⅲ区与核酸探针SS的Ⅲ^*区互补，使得核酸探针SS上的G-quadruplex序列被绑定；

核酸探针SS从5'端开始依次为Ⅲ^*和Ⅳ区域，其中Ⅲ^*区与核酸探针的Ⅲ区互补，Ⅲ^*和Ⅳ区共同构成G-quadruplex序列；

核酸探针FS从5'端开始依次为Ⅲ^*和Ⅱ^*区域，其中Ⅲ^*和Ⅱ^*区分别与核酸探针LS的Ⅲ和Ⅱ区完全互补。

作为上述试剂盒的进一步改进，核酸探针LS中I区独立包含6～8个碱基，Ⅱ区独立包含12～19个碱基，Ⅲ区独立包含10～18个碱基。

作为上述试剂盒的进一步改进，核酸探针SS中的Ⅳ区包含7～8个碱基。

作为上述试剂盒的进一步改进，核酸探针LS中，Ⅱ区的序列为：AAATAAAATAGTAAAGAGA，Ⅲ区的序列为：GCCCTACCCAATCTGTGC。

作为上述试剂盒的进一步改进，核酸探针SS的Ⅳ区序列为：GGGTTGGG。

作为上述试剂盒的进一步改进，待测基因为HIV-1；

核酸探针LS的序列为：5'-CTGGGATT-AAATAAAATAGTAAAGAGA-GCCCTACCCAATCTGTGC-3'；

核酸探针SS的序列为：5'-GCACAGATTGGGTAGGGC-GGGTTGGG-3'；

核酸探针HS的序列为：5'-TCTCTTTACTATTTTATTT-3'；

核酸探针FS的序列为：5'-GCACAGATTGGGTAGGGCTCTCTTTACTATTTTATTT-3'。

作为上述试剂盒的进一步改进，缓冲液包括Tris-HCl缓冲液、PBS缓冲液、HEPES缓冲液。