[发明专利]一种基于微膜法的超微量蛋白定量检测方法

权利要求书

1.一种基于微膜法的超微量蛋白定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、在0.45μm孔径的水系微孔滤膜载体上进行点样，对纳克级蛋白进行标准定量，得到每个蛋白点灰度面积值后绘制标准的定量曲线；

步骤二、将待测样本按照步骤一的方式，在0.45μm孔径的水系微孔滤膜载体上进行点样和定量，得到待测样本每个蛋白点灰度面积值；

步骤三、将待测样本每个蛋白点灰度面积值代入步骤一的标准定量曲线进行计算，得出待测样本蛋白含量；

所述的步骤一具体过程如下：

(1)在0.45μm孔径的水系微孔滤膜上用铅笔画出方格，将标准品样本设置多个梯度溶液，每个方格点1μl样品，每个样品重复点三次；

(2)点样结束后，使滤膜自然干燥，或用电吹风吹干，避免滤纸出现褶皱；

(3)将滤膜置于考染液中浸泡5分钟；水洗3min；再用脱色液脱色10分钟；

(4)扫描仪进行灰度扫描；得到每个蛋白点灰度面积值(Volume值)后绘制定量曲线；

所述的考染液为：1.0g考马斯亮蓝R-250溶于450ml甲醇、450ml超纯水以及100ml冰醋酸溶液中得到的混合液；

所述的脱色液为：甲醇100mL、冰醋酸100ml和超纯水800ml的混合液。