[发明专利]复合型胞内金黄色葡萄球菌抗菌制剂及其制备和应用

说明书

本发明提供了一种复合型胞内金黄色葡萄球菌抗菌制剂及其制备和应用。所述抗菌制剂包括载体细菌承载噬菌体的复合物，所述载体细菌为金黄色葡萄球菌，所述噬菌体为金黄色葡萄球菌烈性噬菌体。优选所述载体细菌为金黄色葡萄球菌SH‑5，所述噬菌体为噬菌体SLPW。所述抗菌制剂的制备方法，包括如下步骤：S1、噬菌体的纯化；S2、用载体细菌吸附噬菌体后，得到载体细菌承载噬菌体的复合物。本发明的复合型胞内抗菌制剂能够进入皮肤角质细胞内部，高效杀死细胞内感染的MRSA菌株；经细菌‑噬菌体复合物处理后的感染的角质细胞状态恢复迅速，细胞的促炎性细胞因子和细胞毒性显著下降。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，包括借助承载噬菌体的载体细菌，进入真核细胞内部杀灭耐药金黄色葡萄球菌的方法，具体地，涉及一种复合型胞内金黄色葡萄球菌抗菌制剂及其制备和应用。

背景技术

皮肤角质细胞是表皮中最主要的细胞，积极参与和协调皮肤的先天免疫反应。最近的研究表明，在金黄色葡萄球菌感染的早期，角质细胞能够发挥类似免疫细胞的功能抵抗金黄色葡萄球菌的感染。研究表明金黄色葡萄球菌能够入侵角质细胞并在其内持续存活，从而逃避免疫反应，导致皮肤的持续感染。然而，大多数抗菌药物对金黄色葡萄球菌在细胞内的持续感染束手无策。例如，抗生素很难自由的进入真核细胞，无法有效地杀灭细胞内的细菌；而小分子抗菌肽抗菌谱较广，从而导致皮肤中微生态平衡的破坏。此外，近年来，由于抗生素的过度使用，临床分离的金黄色葡萄球菌出现了严重的耐药情况(例如耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA)的出现)，这对金黄色葡萄球菌引起的胞内感染的治疗提出了更严峻的挑战，因此寻求一类高效不耐药的杀灭细菌胞内感染的新型抗菌方法显得尤为重要。

噬菌体，作为一类可以感染并裂解细菌的病毒，是地球上最广泛存在的微生物。在过去的15年中，随着越来越多的葡萄球菌噬菌体被分离和鉴定，葡萄球菌，特别是金黄色葡萄球菌的噬菌体疗法取得了前所未有的进展。临床研究发现，金黄色葡萄球菌噬菌体能够靶向治疗疾病中的病原体，如金黄色葡萄球菌引起的菌血症，眼部感染及相关肺部感染。与传统的抗生素相比，噬菌体成本低，量产迅速，没有副作用，并且对耐药细菌有良好的杀菌效果。此外，通常认为噬菌体仅能识别细菌细胞壁上的受体，而与真核细胞不产生直接作用，因此单独使用噬菌体无法清除真核细胞内感染的细菌。

发明内容

本发明的目的在于克服现有抗菌制剂对解决胞内细菌感染的不足，提供一种能够进入真核细胞内部的噬菌体疗法。具体地，本发明的目的是提供一种复合型胞内金黄色葡萄球菌抗菌制剂及其制备和应用。

为了将噬菌体应用于治疗MRSA菌株的胞内感染，本发明将承载着金黄色葡萄球菌烈性噬菌体的载体细菌复合物(phage-loaded bacteria，PLB)加入角质细胞内，噬菌体能够随着载体细菌的入侵而进入角质细胞内部，从而高效杀死细胞内感染的MRSA菌株。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

第一方面，本发明提供一种复合型胞内抗菌制剂，所述抗菌制剂包括载体细菌承载噬菌体的复合物，所述载体细菌为金黄色葡萄球菌，所述噬菌体为金黄色葡萄球菌烈性噬菌体。

优选地，所述载体细菌为金黄色葡萄球菌SH-5，所述噬菌体为噬菌体SLPW。该噬菌体为本实验室分离(Wang,Z.,Zheng,P.,Ji,W.,etc.SLPW:A Virulent BacteriophageTargeting Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus In vitro and In vivo[J].Frontiers in microbiology,2016,7 934.)，在体内外能高效杀灭多种类型的金黄色葡萄球菌。

第二方面，本发明提供一种复合型胞内抗菌制剂的制备方法，包括如下步骤：

S1、噬菌体的纯化；

S2、用载体细菌吸附噬菌体后，得到载体细菌承载噬菌体的复合物。