[发明专利]一种三疣梭子蟹WNT4基因及其应用在审
| 申请号： | 201910059641.7 | 申请日： | 2019-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN110330555A | 公开（公告）日： | 2019-10-15 |
| 发明（设计）人： | 付媛媛;刘磊;王春琳;朱芳 | 申请（专利权）人： | 宁波大学 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70 |
| 代理公司： | 宁波诚源专利事务所有限公司 33102 | 代理人： | 张一平;叶桂萍 |
| 地址： | 315211 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 三疣梭子蟹 表达产物 宿主细胞 基因 基因重组蛋白 重组表达载体 表达载体 分离纯化 分子机制 基因工程 基因基因 基因重组 细胞反应 细胞命运 下游效应 诱导表达 重组蛋白 附肢 构建 增殖 制备 应用 分化 再生 | ||
1.一种三疣梭子蟹WNT4基因，其特征在于：该三疣梭子蟹WNT4基因为PtWNT4，所述PtWNT4的核苷酸序列如SEQ NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的三疣梭子蟹WNT4基因，其特征在于所述的PtWNT4的氨基酸序列为：
MetGlnSerSerAlaGluLeuGluProHisArgTyrArgGluGluCysAsnAsnLeuThrTyrLeuValAlaLysGlnLysGlnLeuCysArgLeuSerGlnAsnValLeuLysThrValSerGlnGlyAlaArgMetGlyIleSerGlnCysGlnHisGlnPheSerMetHisArgTrpAsnCysSerThrPheSerAspSerProTyrValPheGlyHisLeuLeuArgIleLysSerArgGluLysAlaTyrValTyrAlaIleSerAlaAlaGlyValAlaTyrSerValThrArgAlaCysSerArgGlyGluLeuThrGluCysGlyCysAspGluArgIleArgGlnArgProThrArgGlyArgTrpValTrpGlyGlyCysSerGluAspLeuArgPheGlyGluTyrPheSerLysGluPheValAspAlaArgGluAlaArgAsnThrAlaGluGlyLeuMetAsnLeuHisAsnAsnGluAlaGlyArgArgAlaIleArgSerGluMetGluLeuValCysLysCysHisGlyValSerGlySerCysSerMetArgValCysTrpArgArgMetGlyAlaPheThrAsnIleGlyAspSerIleLeuGlnArgPheGluGlyAlaSerIleValArgPheValLysLysArgLysArgLysLysLeuArgProLeuLysArgGlyPheLysArgProThrArgArgAspLeuValTyrLeuGluGluSerProAspTyrCysThrArgAsnGluAspLeuGlyValLeuGlyThrThrGlyArgLeuCysAsnLysThrAsnTrpGlyMetAspGlyCysArgLeuLeuCysCysGlyArgGlyTyrGlnThrMetValLysGluValThrGluLysCysAsnCysArgPheValTrpCysCysLysValHisCysGluLysCysGlnValSerArgGluGluHisTyrCysAsn 。
3.根据权利要求2所述的三疣梭子蟹WNT4基因，其特征在于所述的PtWNT4的特异性引物对的序列分别为SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3，其中
上游引物的核苷酸序列SEQ ID NO.2为：5'CGGAATTCATGAAGAGGGTGCGGCCC3'；
下游引物的核苷酸序列SEQ ID NO.3为：5'CGCTCGAGGTTACAATAATGTTCCTCACG3'。
4.一种制备如权利要求1～3任意一项所述的三疣梭子蟹WNT4基因的重组蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)构建三疣梭子蟹WNT4基因重组表达载体；
(2)将步骤(1)所得重组表达载体导入宿主细胞，并将宿主细胞进行诱导表达，获得表达产物；
(3)将分离纯化步骤(2)所得的表达产物，获得重组蛋白，即三疣梭子蟹WNT4基因重组蛋白。
5.根据权利要求4所述的三疣梭子蟹WNT4基因重组蛋白的制备方法，其特征在于在所述步骤(1)中的表达载体选用pET28a(+)。
6.根据权利要求4所述的三疣梭子蟹WNT4基因重组蛋白的制备方法，其特征在于在所述步骤(2)中，所述宿主细胞为大肠杆菌TOP10F'。
7.一种根据权利要求1～6任意一项所述的三疣梭子蟹WNT4基因在细胞WNT信号通路的应用。
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