[发明专利]非洲猪流感病毒DNA连接酶的晶体及其制备方法和应用

权利要求书

1. 一种非洲猪流感病毒DNA连接酶AsfvLIG的晶体，其特征在于，参数为：

晶体空间群：P2₁

晶胞参数：a=72.257 Å，b=55.159 Å，c=79.875 Å，α=γ=90°，β=103.15°。

2.根据权利要求1所述的晶体，其特征在于，晶体三维结构中，一个晶体学不对称单位中有一个蛋白分子，由9个α螺旋以及17个β折叠组成。

3.根据权利要求2所述的晶体，其特征在于，所述的晶体三维结构具体组成如下：α螺旋1，即含有Asn3-Gln4，β折叠1，即含有Gln8-Ser10，β折叠2，即含有Ile13-Cys15，β折叠3，即含有Ile19-Thr23，β折叠4，即含有Gly26-Val38，：α螺旋2，即含有Asp48-Ser52，β折叠5，即含有Val59-Val68，β折叠6，即含有Thr79-Val81，α螺旋3，即含有Val95-Ala111，β折叠6，即含有Ile147-Lys151，β折叠6，即含有Ile155-Lys170，α螺旋4，即含有Asp181-Phe191，β折叠7，即含有Tyr199-Tyr205，α螺旋5，即含有Leu211-Asn219，β折叠8，即含有His228-Phe235，α螺旋6，即含有Ser244-Gln257，β折叠9，即含有Ile266-Gln269，α螺旋7，即含有Val275-Glu288，β折叠10，即含有Glu291-Arg296，β折叠11，即含有Leu314-Leu317，β折叠12，即含有Leu321-Gln332，β折叠13，即含有Ile342-Leu348，β折叠14，即含有Lys351-Lys359，α螺旋8，即含有Tyr363-Lys372，α螺旋9，即含有Pro375-Leu382，β折叠15，即含有Gly384-Ser395，β折叠16，即含有Gly399-Leu402，β折叠17，即含有Arg405-Phe409。

4.根据权利要求1-3之一所述的晶体，其特征在于，所述的DNA连接酶AsfvLIG的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。

5.一种如权利要求1-4之一所述的非洲猪流感病毒DNA连接酶AsfvLIG的晶体的制备方法，具体步骤为：

（1）将预先制备好的高纯度AsfvLIG蛋白浓缩至0.4-0.6mM, 并加入等体积的对应的浓度为0.4-0.6mM的DNA底物，所述DNA底物含有三条DNA链，其序列分别为SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4；

（2）使用商业化结晶试剂盒作为晶体生长的初筛条件，用座滴气象扩散法进行结晶，通过优化调整，最终在0.05-0.5M的醋酸铵，pH为4-6、浓度为0.1-0.3M 的BIS-TRIS，5-18%的分子量为100-10000的PEG分子条件下，得到衍射分辨率高的晶体。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述非洲猪流感病毒DNA连接酶AsfvLIG的蛋白纯度在90%以上。

7.如权利要求1所述的非洲猪流感病毒DNA连接酶AsfvLIG的晶体结构在药物设计、制备或药物筛选中的用途。

8. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于， AsfvLIG 的NTD结构域以及催化位点：N153、L211、L402、Q403附近的口袋都是AsfvLIG特异性的，作为理想的药物设计靶点，用于设计针对非洲猪瘟病毒的小分子药物与筛选大分子抗体。