[发明专利]一种葡聚糖硫酸钠联合脂多糖诱导的小鼠原代结肠粘膜上皮细胞炎症模型的建立方法有效
| 申请号： | 201910063587.3 | 申请日： | 2019-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN110343657B | 公开（公告）日： | 2021-02-19 |
| 发明（设计）人： | 郭世宁;黎增权;晁利民;陈文谦;李岳飞;吕伟杰 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 崔红丽 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 聚糖 硫酸钠 联合 多糖 诱导 小鼠 结肠 粘膜 上皮细胞 炎症 模型 建立 方法 | ||
1.一种葡聚糖硫酸钠联合脂多糖诱导的小鼠原代结肠粘膜上皮细胞炎症模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)用含2％～5％FBS的iCell原代上皮细胞培养液调整小鼠原代结肠粘膜上皮细胞浓度为0.5×105～1×106个/mL，并接种于细胞培养板，培养过夜；然后每孔加入等体积的含有10～15％葡聚糖硫酸钠的不含血清的iCell原代上皮细胞培养液，继续培养2～4h；
(2)弃去细胞培养液，PBS浸泡，弃去，每孔再加入等体积的含有1～10μg/mL脂多糖的不含血清的iCell原代上皮细胞培养液，继续培养12～24h，收集细胞，或者，每孔再加入等体积的含有100μg/mL脂多糖的不含血清的iCell原代上皮细胞培养液，继续培养12h，收集细胞，得到葡聚糖硫酸钠联合脂多糖诱导的小鼠原代结肠粘膜上皮细胞炎症模型。
2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的葡聚糖硫酸钠的浓度为10～12.5％；
步骤(1)中所述的继续培养的时间为2～3h。
3.根据权利要求2所述的建立方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的葡聚糖硫酸钠的浓度为10％；
步骤(1)中所述的继续培养的时间为3h。
4.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的FBS的浓度为2％；
步骤(1)中所述的调整小鼠原代结肠粘膜上皮细胞浓度为1×105个/mL。
5.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的细胞培养板为96孔板或者24孔板。
6.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的脂多糖的浓度为10μg/mL；
步骤(2)中所述的继续培养的时间为12h。
7.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的PBS浸泡的时间为10秒。
8.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：
步骤(1)和(2)中所述的培养的条件为37℃，5％CO2培养箱中培养。
9.一种葡聚糖硫酸钠联合脂多糖诱导的小鼠原代结肠粘膜上皮细胞炎症模型，其特征在于：通过权利要求1～8所述的方法建立得到。
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