[发明专利]有机磷降解酶高密度发酵制备方法在审

专利信息
申请号: 201910068545.9 申请日: 2019-01-24
公开(公告)号: CN109593734A 公开(公告)日: 2019-04-09
发明(设计)人: 李立公;管立忠;王璋 申请(专利权)人: 北京森根比亚生物工程技术有限公司
主分类号: C12N9/00 分类号: C12N9/00;C12N15/52;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84
代理公司: 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 代理人: 余光军
地址: 101407 北京市怀*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 发酵罐 高密度发酵 三级种子 有机磷降解酶 重组毕赤酵母 毕赤酵母 酵母菌株 降解酶 机磷 溶氧 制备 酵母表达载体 外源蛋白表达 发酵培养基 二级种子 酵母生长 酵母细胞 一级种子 营养物质 诱导培养 培养基 补料罐 发酵液 种子罐 补加 补料 残糖 构建 甲醇 菌体 扩培 生产成本 发酵 诱导 转入 生长 分析
【权利要求书】:

1.一种有机磷降解酶的高密度发酵制备方法,其特征在于,包括:

(1)构建含有机磷降解酶的毕赤酵母酵母表达载体并转入到毕赤酵母得到重组毕赤酵母酵母菌株;(2)将重组毕赤酵母酵母菌株依次在一级种子发酵罐、二级种子发酵罐和三级种子发酵罐中进行扩培得到三级种子液;(3)将三级种子液接入到发酵罐中的高密度发酵培养基中进行发酵并进行诱导培养表达;期间,通过补料罐补加甘油或甲醇。

2.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法,其特征在于,步骤(2)将重组毕赤酵母酵母菌株依次在一级种子发酵罐、二级种子发酵罐和三级种子发酵罐中进行扩培得到三级种子液时,增大一级种子罐、二级种子罐以及三级种子罐的配料体积。

3.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法,其特征在于,按体积比计,所述种子罐的接种量为10%。

4.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法,其特征在于,对所述的发酵罐的结构进行下述改进:

(1)将罐底中间位置,进行改造,使空气喷出就被搅拌器打碎;

(2)调整了管口与罐底距离;

(3)调整最下组搅拌器距罐底距离。

5.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法,其特征在于,通过滴加消泡剂的方式消除发酵过程中产生的泡沫。

6.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法,其特征在于,在发酵培养时增大流加量以提高酶活增长速率。

7.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法,其特征在于,所用到毕赤酵母菌株是重组毕赤酵母(Pichia pastoris)G115。

8.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法,其特征在于,所用到的一种子培养基或二级种子培养基是YPD培养基。

9.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法,其特征在于,所用到的三级种子培养基或发酵培养基由BMGY培养基和盐组成。

10.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法,其特征在于,所述的发酵培养条件是:发酵温度32℃,罐压0.05Mpa。

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