[发明专利]添加D-氨基酸混合物培养基及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种添加D‑氨基酸混合物培养基及其制备方法与应用，将D‑氨基酸混合物加入培养基可提高乳酸乳球菌耐酸性和乳酸链球菌素(Nisin)产量。将原始菌株在加入D‑氨基酸混合物的培养基中发酵12h，培养到8h时Nisin产量达到最大，原始菌株提高1.5～1.7倍，8h酸应激存活率提高1.4～1.7倍。本发明的D‑氨基酸混合物对产物Nisin和菌株抗逆性有明显的影响，其中Nisin是一种安全无毒的食品防腐剂，D‑氨基酸在食品、医药等方面广泛应用。

技术领域

本发明涉及微生物领域，特别涉及一种添加D-氨基酸混合物培养基及其制备方法与应用。

背景技术

D-氨基酸广泛存在于微生物、植物、动物中，并且可以应用于食品、药物和化妆品中。细胞生长过程中D-氨基酸的产生和释放，可调节多种生理变化，例如细胞壁生物合成、生物膜完整性和孢子萌发等。

乳酸乳球菌是一种原核微生物，广泛存在于乳制品中，在食品工业中应用广泛，对人和动物无致病性，是被公认安全的食品级微生物。乳酸链球菌素(Nisin)是乳酸乳球菌产生的一种多肽物质，由34个氨基酸残基组成，分子量约为3500Da，可被人体吸收。Nisin是一种安全无毒的食品防腐剂，主要应用于食品行业，它能有效的抑制引起食品腐烂的多种革兰氏阳性菌的生长，如乳酸杆菌、葡萄球菌、李斯特菌、耐热腐败菌、分枝杆菌等，特别是对产生孢子的细菌，如芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌等有很强的抑制作用。乳酸乳球菌作为工业上最主要的nisin产生菌，提高乳酸乳球菌的nisin产量有着重要的作用。而乳酸乳球菌代谢过程中分泌的乳酸对菌体生长及发酵很不利。因此，提高菌体的耐酸性对nisin的发酵生产更有利。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种添加D-氨基酸混合物培养基及其制备方法与应用，克服现有技术中乳酸乳球菌的Nisin产量低的问题。

本发明的技术方案是：

一种添加D-氨基酸混合物培养基，其制备方法包括以下步骤：

(1)分别称取相应质量的D-苯丙氨酸和D-甲硫氨酸加入到70℃预热1M无菌碳酸氢钠溶液中，配制浓度分别为0.8M的母液；

(2)水浴加热溶解，加热期间晃动，防止结块；

(3)溶解后趁热在超净台过无菌水膜，即可按浓度比例范围50mM:0mM～0mM:50mM加入到灭菌培养基中，摇匀。即可得到添加D-氨基酸的发酵培养基。

所述母液pH在9.0左右宜现配现用，应根据所加D-氨基酸浓度适当调整发酵培养基的pH。

步骤(2)中，水浴温度在70-80℃，加热时间为20分钟。

所述发酵培养基的配方为：酵母浸粉15g/L，蛋白胨15g/L，磷酸二氢钾20g/L，蔗糖15g/L，玉米浆3g/L，半胱氨酸0.23g/L，氯化钠1.5g/L，七水-硫酸镁0.15g/L，pH 7.2。

酸应激培养基的配方为：酵母浸粉15g/L，蛋白胨15g/L，磷酸二氢钾20g/L，蔗糖15g/L，氯化钠1.5g/L，七水-硫酸镁0.15g/L，pH 3。

一种添加D-氨基酸混合物培养基的制备方法，包括以下步骤：

(1)分别称取相应质量的D-苯丙氨酸和D-甲硫氨酸加入到70℃预热1M无菌碳酸氢钠溶液中，配制浓度分别为0.8M的母液；

(2)水浴加热溶解，加热期间晃动，防止结块；

(3)溶解后趁热在超净台过无菌水膜，即可按浓度比例范围50mM:0mM～0mM:50mM加入到灭菌培养基中，摇匀。即可得到添加D-氨基酸的发酵培养基。

添加D-氨基酸混合物培养基在乳酸乳球菌发酵中的应用。