[发明专利]一种果蔬中复硝酚钠残留量的检测方法

权利要求书

1.一种果蔬中复硝酚钠残留量的检测方法，其特征在于包括以下具体步骤：

（1）、标准曲线绘制

称取复硝酚钠三种有效成分标准品邻硝基苯酚钠、对硝基苯酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠并用乙腈稀释，得到10 mg/L复硝酚钠溶液，用乙腈稀释10 mg/L 复硝酚钠溶液，得到0.001mg/L—1.0mg/L一系列复硝酚钠标准溶液，进行液相色谱串联质谱分析检测，线性相关性良好；

以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得到邻硝基苯酚钠、对硝基苯酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠3种复硝酚钠有效成分标准曲线；

（2）、样品提取

称取经破壁机匀浆后的待测样品，加入乙腈，涡旋操作，后用滤纸过滤，滤液收集到装有氯化钠的具塞量筒中，盖上塞子，剧烈震荡后室温静置使乙腈相和水相分层；

（3）、净化

从具塞量筒中吸取10.0 mL乙腈溶液，放入烧杯中，将烧杯放在80℃水浴锅上加热，并缓慢通入氮气流，蒸发近干，加入2.0 mL的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，待净化；

将氨基柱用4.0 mL的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂预洗，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，加入待净化液，用3 mL的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱，并重复一次，离心管收集洗脱液；将离心管在氮吹仪上，40-50℃氮吹蒸发至近干，加入 1.0 mL甲醇；在混合器上混匀后，过0.2 μm滤膜，待测；

（4）、回收率测定

称取经破壁机匀浆后的空白样品，分别按0.005 mg/kg、0.05mg/kg和0.1 mg/kg添加量加入复硝酚钠标准溶液，重复步骤（2）和步骤（3），进行液相色谱串联质谱分析，与步骤（1）复硝酚钠标准曲线比较，计算，得出复硝酚钠测定值，并计算回收率；

（5）、样品复硝酚钠含量测定

将步骤（3）中待测液检测所得复硝酚钠峰面积与步骤（1）中复硝酚钠标准曲线比较、计算，得到待测样品中实际的复硝酚钠含量；

所述步骤（1）、（4）中，液相色谱条件为色谱柱：shim-pack XR-ODS 2.0×75 mm×1.6 μm；柱温 40℃；流动相A：2 mmol/L碳酸铵或氨水，流动相B：甲醇；流动性梯度为1.0 min 10%B，6.0 min 50%B，9.0min70%B，10.0min95%B，13.0min 95%B，13.5min10%B；流速为0.4 mL/min；进样量 1μL；

质谱条件为负离子电喷雾电离模式；DL管温度250℃；加热模块温度400℃；干燥气流速15 L/min，碰撞气压力 230 kPa；扫描方式为多反应监测；

邻硝基苯酚钠定量离子对：138.2/156.1；定性离子对：138.2/46.0；

对硝基苯酚钠定量离子对：138.2/156.1；定性离子对：138.2/46.0；5-硝基邻甲氧基苯酚钠定量离子对：168.2/153.0；定性离子对：168.2/123.0。

2.如权利要求1所述的一种果蔬中复硝酚钠残留量的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中，线性相关性良好的具体浓度范围是：邻硝基苯酚钠在0.05mg/L-1.0 mg/L之间线性良好，对硝基苯酚钠在0.001mg/L-0.5mg/L之间线性良好，5-硝基邻甲氧基苯酚钠在0.001mg/L-0.5mg/L之间线性良好。

3.如权利要求1所述的一种果蔬中复硝酚钠残留量的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中，复硝酚钠3种有效成分标准曲线分别为：邻硝基苯酚钠y=215174X+267.2，相关系数r²=0.9999；对硝基苯酚钠y=25365200X+121364，相关系数r²=0.9999；5-硝基邻甲氧基苯酚钠y=15015900X-45463.6，相关系数r²=0.9998。

4.如权利要求1所述的一种果蔬中复硝酚钠残留量的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中，称取待测样品质量为20-30 g，加入乙腈为20-30 mL，氯化钠的加入量为5-7g。

5.如权利要求1所述的一种果蔬中复硝酚钠残留量的检测方法，其特征在于：所述步骤（3）中，二氯甲烷和甲醇的混合溶剂的体积比为二氯甲醇：甲醇=95:5。