[发明专利]幽门螺杆菌检测体系及检测试剂盒和应用

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及一种复合扩增体系及检测试剂盒和应用，更具体的说，它涉及幽门螺杆菌的鉴定、分型及抗生素耐药性检测体系及试剂盒，即幽门螺杆菌检测体系及试剂盒和应用。本发明提供一种幽门螺杆菌检测体系，包括4种分别用于幽门螺杆菌的鉴定、分型及抗生素耐药性的扩增体系的一种或多种的组合，可以无创、快速、便捷、准确、全面的用于幽门螺杆菌鉴定、分型及抗生素耐药性检测体系。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种复合扩增体系及检测试剂盒和应用，更具体的说，它涉及幽门螺杆菌的鉴定、分型及抗生素耐药性检测体系及试剂盒，即幽门螺杆菌检测体系及试剂盒和应用。

背景技术

幽门螺杆菌是一种以人体为主要宿主的呈螺旋形弯曲的革兰氏阴性杆菌，因其可通过手、不洁食物、粪便等途径传染，在人群中感染率很高，全球幽门螺杆菌的感染率超过50％。我国幽门螺杆菌的感染率约为56％。幽门螺杆菌是一种具有高感染性的致病菌。幽门螺杆菌与慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤、胃癌发生密切相关。早在1994年，WHO下属国际癌症研究机构已将幽门螺杆菌感染定为胃癌的I类致癌因子。全国幽门螺杆菌感染处理共识报告显示：幽门螺杆菌感染是预防胃癌最重要的可控危险因素，根除幽门螺杆菌感染可有效降低胃癌的发生率。

流行病学资料显示，幽门螺杆菌感染者几乎都存在慢性活动性胃炎，其中15％～20％发生消化性溃疡，5％～10％发生幽门螺杆菌相关消化不良，约1％发生胃恶性肿瘤(胃癌、MALT淋巴瘤)，幽门螺杆菌感染导致不同严重程度的疾病，可能与幽门螺杆菌菌株毒力不同以及人群易感性差异有关。CagA蛋白是一种来源于幽门螺杆菌的致癌性蛋白。CagA蛋白依赖IV分泌系统(T4SS)转位至上皮细胞内，并被Src和Abl蛋白激酶磷酸化。磷酸化的CagA蛋白再与SH2磷酸酶相互作用，最终导致胃黏膜上皮细胞发生改变，该改变可能与胃黏膜组织的癌变密切相关。幽门螺杆菌中存在两种CagA等位基因类型，即东亚型与西方型。一项meta分析显示，相较于西方型菌株，CagA东亚型(EPIYA-D)菌株会显著增加胃癌发病风险(OR＝1.91,95％CI＝1.19-3.07,P＝.008)。CagA东亚型的高致癌性可能与其和SH2结构域的高亲和力有关。

由于抗生素的耐药性，导致幽门螺杆菌的根除率逐年降低。幽门螺杆菌耐药率上升是根除率下降最主要的原因。目前我国推荐用于根除治疗的6种抗菌药物中，克拉霉素(耐药率20％～50％)、甲硝唑(40％～70％)和左氧氟沙星(20％～50％)均已有相当高的耐药率。常规药敏试验是通过细菌培养法来进行，因其需要在胃镜下对胃黏膜进行活检，并且培养周期较长，培养技术要求较高，可及性较低，难以大规模开展。现已证实这些抗生素的耐药机制与幽门螺杆菌的基因突变有关。快速检测幽门螺杆菌的耐药相关基因突变有助于幽门螺杆菌根除治疗方案的选择。幽门螺杆菌对克拉霉素耐药受多种因素影响，研究表明，幽门螺杆菌的23S rRNA突变A2142G和A2143G是目前已明确的幽门螺杆菌耐克拉霉素的原因。有研究表明，绝大部分的幽门螺杆菌对左氧氟沙星耐药，是由于幽门螺杆菌上的gyrA基因Asn87或Asp91位点上的点突变所导致。

幽门螺杆菌的筛查方法有多种，不同方法的灵敏度和实用性均存在一定不足。比如常见的幽门螺杆菌呼气检测操作简单方便，但不能进行幽门螺杆菌分型和耐药性检测，而血清蛋白试验、活组织检查、胃黏膜常规染色、药物敏感性试验等医学检验手段操作繁琐、技术难度高，而且有创、具有一定的侵入性，取样环节需要进行严格的质量控制，难以快速普及。

鉴于上述情况，需要一种无创、快速、便捷、准确、全面的用于幽门螺杆菌鉴定、分型及抗生素耐药性检测体系及方法。本项目可通过粪便、血液、胃部灌洗液等多种样本进行检测，具有无创、非侵入、可居家取样等特点；采用实时荧光定量PCR技术(QuantitativeReal-time PCR,本文中简称qPCR)，可一次性同时进行感染、基因分型和耐药基因的快速准确检测。

发明内容