[发明专利]一种国兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法

权利要求书

1.一种春兰和建兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法，其包括下述步骤：

(1).选择外植体：选择成株三分之一大小并且已经展开二至三叶的新芽作为外植体；

(2). 对外植体进行切取前预处理:首先，将待切取的所述外植体的植株置于遮光率为75%、湿度为60%-80%的消毒温室环境中隔离，并将新芽的假鳞茎下方5cm基质清除，使其裸露，在隔离期间，每日向所述外植体的植株整体喷洒1-2次1000倍广谱杀菌剂，并不对其进行浇水，控水一至两周的时间，其中，所述隔离的环境为经过熏蒸及地面泼洒石灰水消毒后的环境；并且根据季节和天气状况的不同调整所述控水的时间和喷洒所述1000倍广谱杀菌剂的次数；

(3). 切取及阴干外植体；将前一步骤中预处理过的待切取的所述外植体的植株脱盆，彻底露出芽体，紧贴假鳞茎基部将芽体垂直切下并保证芽体的完整性，之后剥除芽体外部鳞片状苞叶，切除肉质根，削去假鳞茎基部黑褐色的老旧组织，剪切芽体的上部的叶片，保留叶片为原长度的三分之一，之后将芽体放置到温度为18-25℃，湿度为20%-60%的洁净的室内，自然阴干18-24小时；

(4). 对外植体进行两次消毒：首先，用10%次氯酸钠溶液震荡消毒40分钟，之后用无菌水震荡冲洗两次，每次15分钟；然后将冲洗好的芽体置于无菌滤纸上，吸干表面水分，并剥去芽体表面2-3片苞叶，切除假鳞茎基部表面的黄褐色的老旧组织；再剪切掉第（3）步中的剩余叶片长度的三分之二，并将芽体切成2-3cm的大小，然后将处理好的芽体再次置于10%次氯酸钠溶液中震荡消毒30分钟；之后用无菌水再次震荡冲洗三次，每次5分钟；最后将冲洗好的芽体置于无菌滤纸上，剥除芽体表面1-2片苞叶，切除假鳞茎基部所有老旧组织；切除剩余所有叶片；

(5).完成消毒后切体及培养：将第四步中完成消毒后的芽体切成以生长点为中心的0.5-0.7cm长度以获得无菌的茎尖生长组织，再转接入适宜的培养基中，并及时置于温度为20-27℃的黑暗环境下以防止褐化并进行培养。

2.如权利要求1所述的春兰和建兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法，其特征在于，所述选择外植体的时间可以是一年中的任意时间。