[发明专利]一种国兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法

说明书

本发明涉及一种国兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法，其包括下述步骤：(1)选择外植体；(2)对外植体进行预处理；(3)切取及阴干外植体；(4)对外植体进行两次消毒；(5)完成消毒后切体及栽培。根据本发明的国兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法，适用于所有的国兰品种，其在降低污染率和褐化率的同时，能大幅提高植体的成活率，具有较强的推广应用前景并且能产生较高的经济效益。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术，特别是，本发明涉及一种国兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法。

背景技术

以下对本发明的相关技术背景进行说明，但这些说明并不一定构成本发明的现有技术。

国兰为兰科兰属多年生地生兰，主要包括春兰、蕙兰、建兰、墨兰、寒兰、莲瓣兰和春剑，广泛分布于我国的东南和西南地区，在我国栽培历久悠久，文化价值丰富，为我国传统十大名花之一。

传统国兰以分株繁殖为主，繁殖速度较慢，繁殖系数低，容易感染，对操作者的技术也要求比较高。而且长期分株繁殖，容易使植株携带病毒，导致品种特性的退化，这些都会限制国兰新优品种和传统名品的推广和保护，更难满足国兰大规模生产的需求。而组织培养技术的应用可以使国兰达到快速繁殖、品种复壮等目的，加快育种进程、拯救珍稀濒危物种，并且利用组培技术可以推进国兰工业化生产，取得巨大的经济效益。

国兰的组织培养分为组培播种繁殖和组培茎尖切芽繁殖。通常，播种繁殖获得的种苗变异较多，种苗生长不一致，不能保证遗传性状稳定；而采用国兰茎尖作为外植体进行组培时，外植体的消毒是组培进行的第一步，也是关乎组培技术成功至关重要的一步。外植体取材的时间、大小，所使用的表面消毒剂的种类，消毒时间长短，都会影响外植体消毒的效果。外植体取材过大，存活率较高，但难以彻底消毒，污染率高，当采用高浓度的消毒剂处理时又容易导致外植体的死亡；外植体取材过小，污染率会相对减少，但较小的外植体容易被消毒剂杀死，同时外植体取材过小还容易分泌过多的酚类、醌类物质，从而导致外植体褐化死亡。此外，国兰切芽组培外植体消毒存在以下问题：

1、以往切芽外植体消毒为减少外植体所携带的微生物，取材时间往往受限于一定季节；而且选取的芽体也通常较小，只有成株的十分之一大小，甚至是刚萌发的新芽，由于外植体较为幼嫩，很容易受到消毒剂的伤害，造成外植体死亡或者褐化严重。

2、以往切芽外植体消毒前缺少预处理或者预处理不到位，由于国兰新芽生长于假鳞茎基部，多与基质接触，常常携带较多的内生菌，普通的表面消毒很难杀灭内生微生物，很容易产生污染，导致整个组培的失败。

3、在消毒剂的选择上，为保证消毒效果，往往选用毒性较大的升汞作为消毒剂，消毒时间稍微过长就容易造成外植体死亡，并且升汞不易清洗干净，容易残留在外植体表面，而且对环境污染较大，不环保。

4、消毒方法一般为单一消毒剂或者多种消毒剂联合单次消毒，但由于国兰新芽外附多层苞叶，很难一次清洁干净，对消毒造成一定的难度。

为了解决上述问题，本申请的发明人团队经过长期的试验获得了一种国兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法，其可降低污染率和褐化率，同时提高植体的成活率。

发明内容

本发明的目的在于提出一种能够降低污染率并提高成活率的国兰茎尖组织培养中切芽外植体的消毒方法。