[发明专利]一种生产多拉菌素的发酵培养基及多拉菌素的生产方法

权利要求书

1.一种多拉菌素的生产方法，其特征在于，包括：菌种接种、母瓶种子培养液制备、种子罐种子液制备、发酵培养；

其中，所述发酵培养采用的发酵培养基，其组成为：淀粉100-140g/L、淀粉酶0.1-0.2g/L、黄豆饼粉12-18 g/L、棉籽饼粉12-18 g/L、酵母粉0.5-1.5 g/L、2,2-甲基丁酸0.04-0.07 g/L、环己甲酸或者环己甲酸钠0.2-0.4 g/L、硫酸镁3-5 g/L、硫酸锌0.02-0.1 g/L、磷酸氢二钾2-4 g/L、碳酸钙4-6 g/L、消泡剂0.5-1 g/L；pH值为7.0-7.3；其中，在发酵培养基的配制过程中，所述淀粉不需要经过单独液化，和淀粉酶一起混合灭菌；

在所述菌种接种、母瓶种子培养液制备、种子罐种子液制备步骤中，至少其中一个步骤中的培养基含有2,2-甲基丁酸，其含量为0.04-0.07 g/L；

在所述发酵培养20h后开始流加前体，并控制发酵体系内前体浓度维持在0.1-0.4 g/L之间；

在所述发酵培养的中后期，须补加液化淀粉或麦芽糊精，控制发酵液中总糖含量在2%以上；

所述菌种为阿维链霉菌突变株，其保藏编号：ATCC53568。

2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述发酵培养基，其组成为：淀粉120g/L、淀粉酶0.12g/L、黄豆饼粉15 g/L、棉籽饼粉15 g/L、酵母粉1 g/L、硫酸镁4 g/L、硫酸锌0.06 g/L、磷酸氢二钾3g/L、碳酸钙5g/L、2,2-甲基丁酸0.04-0.07 g/L、环己甲酸或者环己甲酸钠0.3 g/L、消泡剂0.8 g/L。

3.根据权利要求1或2所述的生产方法，其特征在于，包括：

1）菌种活化：将低温保藏的阿维链霉菌突变株接种到斜面培养基上，在 28±2℃条件下，培养 6~8 天，得到孢子；

斜面培养基组成如下，g/L：葡萄糖5.0，麦芽提取物2.0，2,2-甲基丁酸0.04-0.07，酵母提取物5.0，琼脂20，pH7.0-7.3；

2）母瓶种子培养液制备：将经斜面培养所得的孢子接入种子培养基，于28±2℃，摇床转速为 250r/min，培养 40h~60h ；

种子培养基组成如下，g/L：玉米淀粉 20，棉籽饼粉 15，酵母抽提物5，2,2-甲基丁酸0.04-0.07，碳酸钙2，消泡剂0.3，并将种子培养基的 pH 值调节为7.0-7.3；

3）种子罐种子液制备：将母瓶种子培养液按体积比0.2-1.0%接种至一级种子培养基，进行种子培养；

所述种子培养条件如下：种子罐温度28±2℃，罐压0.03-0.06MPa，空气流量1:0.5VVM，搅拌转速100-300rpm；

所述的一级种子培养基组成如下，g/L：玉米淀粉 20，棉籽饼粉 15，酵母抽提物5，2,2-甲基丁酸0.04-0.07，碳酸钙2，消泡剂0.5，并将种子培养基的 pH 值调节为7.0-7.3；

4）多拉菌素的发酵生产：按8-12%的接种量，将步骤3）制备的种子液接入装有3±0.2m3多拉菌素发酵用培养基的容积为5吨的发酵罐中，于温度28±2℃，通气量0.4-1.5VVM，搅拌转速80-250rpm，罐压0.03-0.06MPa的条件下进行发酵培养；全程控制溶氧30%以上，培养周期14-17天。