[发明专利]一种生产多拉菌素的发酵培养基及多拉菌素的生产方法

说明书

本发明涉及一种生产多拉菌素的发酵培养基及多拉菌素的生产方法。所述发酵培养基组成包括：淀粉100‑140g/L、淀粉酶0.1‑0.2g/L、黄豆饼粉12‑18g/L、棉籽饼粉12‑18g/L、酵母粉0.5‑1.5g/L、2,2‑甲基丁酸0.01‑0.2g/L、环己甲酸或者环己甲酸钠0.2‑0.4g/L。本发明通过对发酵培养基及多拉菌素生产方法的改进，显著提高多拉菌素的发酵水平，在发酵370h，效价达到3545μg/ml，且整个生产工艺简单易操作，有利于工业化生产。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种生产多拉菌素的发酵培养基及多拉菌素的生产方法。

背景技术

多拉菌素(Doramectin，DRM)，为新一代大环内酯类抗寄生虫药，通过基因重组的阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis strainNEAU1069)新菌株在发酵过程中以环己烷羧酸(cyclohexanec arboxylic acid，CHC)为前体而生成的一种阿维菌素类抗生素。因多拉菌素抗寄生虫范围广泛、效果显著，给药途径易于掌握，生物利用度高、药物残效期长等优势，已在兽医临床应用于牛、马、绵羊、山羊、猪、骆驼、犬等哺乳动物。

目前多拉菌素的生产主要通过生物发酵的方法进行。CN107723325A公开了一种基于pH控制的多拉菌素发酵生产方法，通过在次级代谢阶段补加生理碱性盐，流加第一碳源，并控制pH在6.7-7.0范围内。所得发酵产量达2100-2300μg/ml。但该方法存在效价相对较低；需要对淀粉进行预处理，工艺工程相对复杂；同时需要通过补加生理碱性盐和流加碳源来控制发酵过程中的pH，易出现控制pH偏差影响代谢水平等的问题。CN108396045A公开了一种通过改进前体加入方式及添加量来提高发酵水平，在发酵375h后，效价达到3558.20μg/ml。该方法虽然效价较高，但存在工艺复杂；对前体加入方式控制严格，稍有偏差就会影响代谢水平；同时，需要将前体分散到乳化体系，要用到甲醇、丙三醇等有机溶剂，增加作业操作及作业人员安全风险等问题。CN108018324A公开了一种生产多拉菌素的发酵培养基，其通过采用特定的复合氮源，显著提高多拉菌素的发酵水平，效价达到2900μg/ml。该方法的效价仍然不是十分理想。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提出一种生产多拉菌素的发酵培养基及多拉菌素的生产方法。本发明通过对发酵培养基及多拉菌素生产方法的改进，显著提高多拉菌素的发酵水平，在发酵370h，效价达到3545μg/ml，且整个生产工艺简单易操作，有利于工业化生产。

本发明的技术方案如下：

一种生产多拉菌素的发酵培养基，包括：淀粉100-140g/L、淀粉酶0.1-0.2g/L、黄豆饼粉12-18g/L、棉籽饼粉12-18g/L、酵母粉0.5-1.5g/L、2,2-甲基丁酸0.01-0.2g/L、环己甲酸或者环己甲酸钠(前体)0.2-0.4g/L。

优选地，所述发酵培养基，包括：淀粉120g/L、淀粉酶0.12g/L、黄豆饼粉15g/L、棉籽饼粉15g/L、酵母粉1g/L、2,2-甲基丁酸0.01-0.2g/L、前体0.3g/L。

进一步优选地，所述2,2-甲基丁酸含量为0.03-0.1g/L，进一步优选为0.04-0.07g/L。所述2,2-甲基丁酸含量≥99％。

所述淀粉选自玉米淀粉、黄豆饼粉为高温黄豆饼粉。

所述发酵培养基的pH值为7.0-7.3。

所述前体为环己甲酸或者环己甲酸钠。