[发明专利]一种虫草参的组织培养方法

权利要求书

1.一种虫草参的组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）外植体的选择及预处理：选用虫草参健壮植株的幼嫩茎段作外植体，将叶片剪去后清洗除去表面污垢，再用流水冲洗30 min-1h后转移至超净工作台上备用；

（2）外植体表面消毒与诱导：将虫草参茎段用75％的乙醇处理10-20 s，再用0.1％氯化汞处理4-6 min，用无菌水冲洗5-7次，将茎段剪成1-2 cm的单芽茎段，接种于诱导培养基中；

（3）培养条件：将接种好的单芽茎段置于光照培养架上进行培养，控制温度为23-27℃，湿度为75％-85％，光照强度为2000-3000 lx，每日光照14 h；

（4）不定芽的分化与增殖：步骤（2）中的单芽茎段在步骤（3）的培养条件下，7-10天观察到不定芽的分化，待新生芽长到3-4cm时，将新生的不定芽剪下，转接至增殖培养基上继代；

（5）壮苗培养：待新生丛芽长至3-4 cm高后，将其切下，接种至壮苗培养基中；

（6）生根培养：选取高3-4 cm，带2-3轮真叶的芽，接种至生根培养基上进行培养；

（7） 炼苗移栽：待组培苗生根后进行炼苗，在温度为20-25°C、光照强度2000 lx，每日光照12 h的条件下，将培养瓶盖打开炼苗 3天；将炼苗后的组培苗小心去除根部培养基，并用质量分数为0. 125%多菌灵溶液清洗根部，种植于育苗钵内；

其中，上述步骤（2）中的诱导培养基和的成分为MS基本培养基+1.0mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0或1.5 g/L活性炭，同时添加蔗糖30g/L、琼脂7g/L，pH为5.8；

步骤（4）中增殖培养基的成分为MS基本培养基+1.0mg/L或2.0mg/L 6-BA+0.1 mg/L或0.2 mg/L NAA+0或1.5 g/L活性炭，同时添加蔗糖30g/L、琼脂7g/L，pH为5.8；

步骤（5）壮苗培养基为MS基本培养基+0或1.5 g/L活性炭+0.2 mg/L NAA+蔗糖+7g/L琼脂，pH为5.8；蔗糖浓度为20 g/L、30 g/L或40 g/L中的一种；

步骤（6）生根培养基以MS或1/2MS作为基本培养基，附加浓度为0.1 mg/L、0.2 mg/L的NAA，蔗糖30 g/L，琼脂7 g/L，pH为5.8；

步骤（7）中的育苗基质为草炭、蛭石和珍珠岩，草炭、蛭石和珍珠岩以体积比2:1:1进行混合，放置于温室大棚内，控制温度为20-25°C，在自然光照下生长不低于10 天。

2.如权利要求1所述的一种虫草参的组织培养方法，其特征在于：上述步骤（1）中外植体的采集在持续三天以上的晴朗天气进行。

3.如权利要求1所述的一种虫草参的组织培养方法，其特征在于：上述步骤（1）中采用洗衣粉水振荡的方法将外植体表面污垢清洗除去。