[发明专利]一种虫草参的组织培养方法

说明书

本发明的虫草参的组织培养方法建立了虫草参幼嫩茎段在离体条件下，通过诱导、扩繁、壮苗、生根等步骤得到商品试管苗的繁殖体系，缩短了繁殖周期，提高了增殖倍数，并使小苗生长状态一致、品质优良，不受季节限制，实现周年生产，实现了通过组织培养途径繁育优质虫草参商品种苗的方法。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体是一种虫草参的组织培养方法。

背景技术

虫草参，又叫地参，唇形科多年生草本植物。株高50-70cm，地下匍匐茎长5-6cm，形似虫草，粗如手指，洁白脆嫩，营养丰富，浑身是宝，不但能作为蔬菜食用，晒干后还能入药，保健作用和药用价值与冬虫夏草相当，具有良好的药食功能及市场效益。

近年来，随着人们对环境自然资源的疯狂索取，导致生态环境日益恶化以及农药的大量使用，传统虫草参几乎面临绝迹。虫草参在产业化生产上主要以无性繁殖方法——根茎繁殖为主，极易受到各种病毒等微生物侵害；生产中随着栽培时间的推移，病害加重，会导致植株减产，种质退化，严重的直接导致植株死亡。植物组织培养技术以其繁殖周期短、效率高、品质保存、管理可控等优势，已被广泛应用于国内外各种植物的繁殖研究。目前有关唇形科虫草参的组织培养研究还未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述现有技术之不足，提供一种便于操作、效果良好的虫草参的组织培养方法。

本发明是以如下技术方案实现的：一种虫草参的组织培养方法，包括如下步骤：

（1）外植体的选择及预处理：选用虫草参健壮植株的幼嫩茎段作外植体，将叶片剪去后清洗除去表面污垢，再用流水冲洗30 min-1h后转移至超净工作台上备用；

（2）外植体表面消毒与诱导：将虫草参茎段用75％的乙醇处理10-20 s，再用0.1％氯化汞处理4-6 min，用无菌水冲洗5-7次，将茎段剪成1-2 cm的单芽茎段，接种于诱导培养基中；

（3）培养条件：将接种好的单芽茎段置于光照培养架上进行培养，控制温度为23-27℃，湿度为75％-85％，光照强度为2000-3000 lx，每日光照14 h；

（4）不定芽的分化与增殖：步骤（2）中的单芽茎段在步骤（3）的培养条件下，7-10天观察到不定芽的分化，待新生芽长到3-4cm时，将新生的不定芽剪下，转接至增殖培养基上继代；

（5）壮苗培养：增殖培养初步阶段，大量激素被用于促进不定芽的萌发。但同时，植株的生长发育和顶端优势也受到了一定影响。因此，壮苗培养十分必要。待新生丛芽长至3-4 cm高后，将其切下，接种至壮苗培养基中；

（6）生根培养：选取高3-4 cm，带2-3轮真叶的芽，接种至生根培养基上进行培养，一周后生根率达100%；

（7） 炼苗移栽：待组培苗生根后时进行炼苗，在温度为20-25°C、光照强度2000lx，每日光照12 h的条件下，将培养瓶盖打开炼苗 3天；将炼苗后的组培苗小心去除根部培养基，并用质量分数为0. 125%多菌灵溶液清洗根部，种植于育苗钵内，成活率达90%以上。

其进一步是：上诉步骤（1）中外植体的采集在持续三天以上的晴朗天气进行。

上诉步骤（1）中采用洗衣粉水振荡的方法将外植体表面污垢清洗除去。

上诉步骤（2）中的诱导培养基和步骤（4）中增殖培养基的成分包括MS基本培养基、6-BA、NAA、活性炭，同时添加蔗糖30g/L、琼脂7g/L，pH为5.8。

6-BA的浓度为 0.5 mg/L、1.0 mg/L或2.0 mg/L中的一种， NAA的浓度为0.1 mg/L、0.2 mg/L或0.5 mg/L中的一种，活性炭的浓度为0或1.5 g/L。