[发明专利]一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法在审
| 申请号： | 201910077035.8 | 申请日： | 2019-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN109556941A | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 姚立蓉;王化俊;汪军成;李葆春;孟亚雄;马小乐;杨轲;王刚;马增科;胡娜;侯静静 | 申请（专利权）人： | 甘肃农业大学 |
| 主分类号： | G01N1/34 | 分类号： | G01N1/34;G01N27/447 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 730070 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 盐生 蛋白提取 细胞质膜 质膜蛋白 根系 聚丙烯酰胺凝胶电泳 损失率 两相分离 上清液 研磨液 有效地 匀浆液 沉淀 悬浮 采集 保存 检测 | ||
1.一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法，其特征在于，采用如下步骤：（1）盐生草根系的采集；（2）根系匀浆液的获得；（3）根系研磨液的离心分离；（4）上清液进一步离心分离；（5）沉淀进行悬浮；（6）两相分离；（7）上相进行离心分离；（8）质膜蛋白的保存；（9）聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。
2.根据权利要求1所述的一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的匀浆研磨液为：50-55 mM TRIZ，500-550 mM蔗糖，10-13%甘油（w/v），20-25 mMEDTA-Na2，20-25 mM EGTA，50-60 mM NaF，5-6 mMβ-glycerophosphate， 1-2 mMphenantroline， 0.6-0.8% PVP（w/v）， 10-13 mM抗坏血酸，pH值为7.0-8.0。
3.根据权利要求1所述的一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法，其特征在于，步骤（3）和步骤（4）中所述的离心管为超高速离心管，且取上清液时，应取靠近管口位置1/2-2/3的上清液，将离心管底部1/3-1/2的液体随沉淀一并舍弃。
4.根据权利要求1所述的一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法，其特征在于，步骤（5）中所述的悬浮液为5-7 mM磷酸缓冲溶液，330-350 mM蔗糖，2-3 mM DTT，10-13 mM NaF，pH值为7.0-8.0。
5.根据权利要求1所述的一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法，其特征在于，步骤（6）中所述的两相分离液为6.4-6.6% Dextran T-500 (w/w)， 6.4-6.6% PEG-3350， 5-7mM磷酸缓冲溶液，5-7 mM KCl和300-350 mM蔗糖，pH值为7.0-8.0。
6.根据权利要求1所述的一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法，其特征在于，步骤（7）中所述的将上相离心分离完后，应将离心管倒置于滤纸上，迅速将离心管壁的水分吸干。
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