[发明专利]一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法

说明书

本发明提供一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法，一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法，采用如下步骤：（1）盐生草根系的采集；（2）根系匀浆液的获得；（3）根系研磨液的离心分离；（4）上清液进一步离心分离；（5）沉淀进行悬浮；（6）两相分离；（7）上相进行离心分离；（8）质膜蛋白的保存；（9）聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。该方法能够有效地获得理想的盐生草根系质膜蛋白，具有操作简单，样品损失率低，纯度高的优点。

技术领域

本发明涉及植物根系细胞质膜蛋白提取领域，具体地说是一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法。

背景技术

细胞质膜存在于细胞表面，主要由膜脂和膜蛋白组成，维护细胞内微环境的相对稳定，参与细胞内与外界环境的物质交换，能量和信息的传递，在细胞的生长和分化中起重要作用，是生物膜功能的主要承担者。盐生植物盐生草（Halogeton glomeratus）具有极强的耐盐性，其根系对Na⁺呈限制性吸收的特性，但是目前盐生草根系对Na⁺的限制性吸收机理仍不明确，分离盐生草根系的质膜蛋白对于研究盐生草根系的耐盐机制，挖掘耐盐基因具有重要意义。当前并没有任何关于盐生草根系质膜蛋白提取方法的报道及可实施的操作方法。因此，提供一种简便、可操作的盐生草根系质膜蛋白的提取方法是具有重要的现实意义。

现有技术存在的问题：现有技术在分离细胞质膜蛋白的过程中，对样品造成的污染较多，损失较大，且分离过程复杂，质膜蛋白获得率较低。盐生草为须根系根系不发达，细胞质膜蛋白含量低，相比其他植物细胞质膜蛋白提取更困难。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明提供了一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法，以盐生草根系为材料，通过密度梯度离心、两相分离技术及超高速离心获得理想的盐生草根系质膜蛋白。

为了达到上述目的，本发明采用了如下的技术方案：

一种盐生草根系细胞质膜蛋白提取的方法，包括如下步骤：

（1）盐生草根系的采集

将盐生草种子置于花盆中进行培养，待幼苗长至1-2个月，采集其根系。

（2）根系匀浆液的获得

将步骤（1）采集的根系置于研钵，并加入匀浆研磨液（根系：匀浆研磨液=1：1），至根系研磨为液体状。

（3）根系研磨液的离心分离

将步骤（2）获得的根系研磨液置于超高速离心机，在26000-30000 g，4℃条件下离心25-30 min，取上清液，弃沉淀。

（4）上清液进一步离心分离

将步骤（3）获得的上清液置于超高速离心机，在84000-90000 g，4℃条件下离心25-30min，取沉淀，弃上清液。

（5）沉淀进行悬浮

将悬浮液加入步骤（4）获得的沉淀中，至沉淀完全溶解。

（6）两相分离

将步骤（5）获得的悬浮液置于两相分离液中（悬浮液：分离液=1：2），并置于超高速离心机，在2000-2500 g，4℃条件下离心10-15 min，取上相，弃下相，并重复该步骤2次。

（7）上相进行离心分离

将步骤（6）获得的上相置于超高速离心机，在85000-90000 g，4℃条件下离心30-35min，取沉淀。

（8）质膜蛋白的保存

将步骤（7）获得的沉淀液氮冷冻，并真空冷冻干燥，最后-80℃保存。

（9）聚丙烯酰胺凝胶电泳检测