[发明专利]一种扩增H5N6亚型禽流感病毒全基因组的通用引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种扩增H5N6亚型禽流感病毒全基因组的通用引物组，其核苷酸序列如下所示：

引物对1：

HA1-F：AGCARAAGCAGGG(SEQ ID NO:1)

HA1-R：TCTGCTCAATAGGTGTT(SEQ ID NO:2)

引物对2：

HA2-F：CCAAAATRAACGGGCA(SEQ ID NO:3)

HA2-R：AGTAGAAACAAGGGTGR(SEQ ID NO:4)

引物对3：

NA-F：AGGGTGAAAATGAAT(SEQ ID NO:5)

NA-R：CTCCTGTTGCTGAAATGCA(SEQ ID NO:6)

引物对4：

M-F：TCTTCTAACCGAG(SEQ ID NO:7)

M-R：TTCTATGTTGACAAA(SEQ ID NO:8)

引物对5：

NS-F：ACACTGTGTCAAG(SEQ ID NO:9)

NS-R：AAGCTGAAACGAGAAGG(SEQ ID NO:10)

引物对6：

NP-F：CGATCTTATGAACAGA(SEQ ID NO:11)

NP-R：CTGCATTGTCTCCGAAG(SEQ ID NO:12)

引物对7：

PA1-F：AGCRAAAGCAGGTACTGATY(SEQ ID NO:13)

PA1-R：CATNCCCATCATCAT(SEQ ID NO:14)

引物对8：

PA2-F：ACATTTTTCGGCTGGAAA(SEQ ID NO:15)

PA2-R：GAAACAAGGCATTTT(SEQ ID NO:16)

引物对9：

PB11-F：GAGACTGGAGCACCYCAACT(SEQ ID NO:17)

PB11-R：AGCRAAAGCAGGCAAACY(SEQ ID NO:18)

引物对10：

PB12-F：CRAAAGCAGGTCAAWTATAT(SEQ ID NO:19)

PB12-R：ACAAGGTCGTTTTWAAACW(SEQ ID NO:20)

引物对11：

PB21-F：ARTTCACAATGGTTGG(SEQ ID NO:21)

PB21-R：ACAAGGCATTTTTTCA(SEQ ID NO:22)

引物对12：

PB22-F：TAATAAAGCTGCTACC(SEQ ID NO:23)

PB22-R：CAGCAGGTYCCTT(SEQ ID NO:24)。

2.一种扩增H5N6亚型禽流感病毒全基因组的试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有权利要求1所述的引物组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：该试剂盒还含有dNTP、Taq酶、反转录酶。

4.一种扩增H5N6亚型禽流感病毒全基因组的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)提取样本RNA，将RNA反转录为cDNA；

2)以cDNA为模板，用权利要求1中所述12对引物对分别进行RT-PCR扩增，获得H5N6亚型禽流感病毒全基因组的扩增产物。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤2)中RT-PCR扩增体系为

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤2)中RT-PCR扩增体系程序为：95℃预变性5min，95℃变性50S、58℃退火30S、72℃延伸3min、进行35个循环，72℃延伸5min。

7.一种H5N6亚型禽流感病毒全基因组的测序方法，其特征在于：按照权利要求4～6任一项所述的方法，获得H5N6亚型禽流感病毒全基因组的扩增产物，将扩增产物用全自动序列测序仪进行测序及拼接，即得H5N6亚型禽流感病毒全基因组的核苷酸序列。