[发明专利]一种快速鉴定乳酸菌的质谱方法

权利要求书

1.一种快速鉴定乳酸菌的质谱方法，其特征在于，包括对乳酸菌的基质辅助激光解吸离子飞行质谱处理，处理过程包括：微生物细胞破碎、微生物蛋白质提取、质谱条件的优化与数据库分析；

微生物细胞破:挑取六个1.5ml无菌离心管分别放入适当菌量，①.加入0.75mL75％乙醇水溶液，液氮冷冻30s，37℃复融1min，反复1次，②加入0.75mL 75％乙醇水溶液，液氮冷冻30s，37℃复融1min，100HZ超声5min，③加入125μL 75％乙醇水溶液同时加入石英砂1-3g，震荡均匀后，进行液氮研磨，研磨物转入离心管后，加入0.70mL 75％乙醇水溶液，以上3种处理后6000-10000r/min离心2min，弃上清备用；

微生物蛋白质提取：c：加入75μL 75％甲酸水溶液，震荡超声10min，加入75μL乙腈，震荡均匀，8000r/min离心2min，取上清1μL上样，d：加入75μL 50％甲酸水溶液，震荡超声10min，加入75μL乙腈，震荡均匀，8000r/min离心2min，取上清1μL上样，e：加入75μL 15％甲酸水溶液，震荡超声10min，加入75μL 50％乙腈水溶液，震荡均匀，8000r/min离心2min，取上清1μL上样，质谱条件的优化与数据库分析：包括设置质谱条件和数据库分析；

质谱条件：固定聚焦337nm，检测器线性阳模式，MALDI离子源，激光束能频750Hz，收集范围1000～30000(m/z)，校准品ATCC 8739大肠杆菌，阈值峰积累类型基线模式，阈值偏差0.020mV,阈值相应1.200×；

数据库分析：分离微生物获得的质谱峰图数据导入MALDI-TOF/SARAMIS微生物鉴定系统进行标识峰识别，利用用SARAMIS Premium软件中的superpectrum对同种乳酸菌的标识峰进行筛选，数学方法拟合标识峰，进行超级谱图的构建，并对特征峰进行加权，构建经鉴定特定种乳酸菌的超级谱库，用于乳酸菌的鉴定。

2.根据权利要求1所述的快速鉴定乳酸菌的质谱方法，其特征在于，微生物细胞破碎过程有液氮研磨或加入中石英砂为液氮研磨。

3.根据权利要求1所述的快速鉴定乳酸菌的质谱方法，其特征在于甲酸的浓度不影响蛋白质的提取，但超声过程影响蛋白质的提取。

4.根据权利要求1所述的快速鉴定乳酸菌的质谱方法，其特征在于，乙醇水溶液和乙腈、甲酸水溶液的添加顺序及添加量是影响蛋白质提取的关键控制方向。

5.根据权利要求1所述的快速鉴定乳酸菌的质谱方法，其特征在于，质谱过程中激光束能频750hz。

6.根据权利要求1所述的快速鉴定乳酸菌的质谱方法，其特征在于，质谱标识峰权重进行调整后对乳酸菌的鉴定的算法有加权调整。