[发明专利]一种高效发酵生产甾药前体的方法

权利要求书

1.一种生产4-雄甾烯-3,17-二酮的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株是以保藏编号为CICC21097的分枝杆菌（Mycobacterium sp.）MNR M3为宿主细胞，以pMV261质粒为表达载体，过表达Ⅱ型NADH脱氢酶基因获得的；所述Ⅱ型NADH脱氢酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: l所示。

2.权利要求1所述的基因工程菌株在生产4-雄甾烯-3,17-二酮中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，

将所述基因工程菌株的种子液按2-10 %的接种量转接于含5-20%废弃油的发酵培养基中，在25-35 ℃，50-200 rpm条件下培养24-168 h；

所述的废弃油为废弃的动植物油或地沟油处理后的上清油。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，采用分批发酵法生产4-雄甾烯-3,17-二酮的方法如下：

将所述基因工程菌株的种子培养液以2-20 %的接种量转接于含5-20%废弃油的发酵培养基中，在25-35 ℃，50-200 rpm条件下培养5天为首批次发酵；

首批次发酵结束后进行重复分批发酵，在每批发酵结束时取出50-90％的培养物并补充等量的新鲜高压灭菌发酵培养基和废弃油，取出部分用于产物提取；除首批次外，剩余批次发酵时间为3天，所有培养批次在相同的培养条件下进行，共进行五批发酵；

所述的废弃油为废弃的动植物油或地沟油处理后的上清油。

5.如权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述发酵培养基组成：K₂HPO₄ 0.1-3 g/L，MgSO₄ 0.1-3 g/L，柠檬酸铁铵0.01-0.2 g/L，柠檬酸1-5 g/L，磷酸氢二铵1-10 g/L，葡萄糖5-50 g/L，植物甾醇1-50 g/L，其余为水，pH 6.0-7.5。