[发明专利]用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒荧光定量PCR的方法及相应试剂盒在审

专利信息
申请号: 201910085184.9 申请日: 2019-01-29
公开(公告)号: CN111485035A 公开(公告)日: 2020-08-04
发明(设计)人: 唐伟;束文圣;杨荣;束浩然;黄斌;蒋华 申请(专利权)人: 广东美格基因科技有限公司
主分类号: C12Q1/70 分类号: C12Q1/70;C12Q1/686
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 518000 广东省深圳市龙岗区吉华街道甘李*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 用于 检测 鳜鱼 传染性 坏死 病毒 荧光 定量 pcr 方法 相应 试剂盒
【权利要求书】:

1.用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1、收集样品;

S2、提取基因组DNA;

S3、利用荧光定量PCR检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因ATPase、MCP和IRB6基因;

S4、读取扩增Ct值;当所述鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因中至少1个基因的Ct值小于35时,鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的检测结果为阳性;当所述鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因ATPase、MCP和IRB6基因的Ct值均大于35时,鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的检测结果为阴性。

2.根据权利要求1所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法,其特征在于,所述步骤S2中还包括设计ATPase、MCP和IRB6基因的检测引物和TaqMan探针的步骤。

3.根据权利要求2所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法,其特征在于,所述鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因ATPase的检测引物如SEQ ID NO:1~2所示,TaqMan探针序列如SEQ ID NO:3所示。

4.根据权利要求1所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法,其特征在于,所述鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因MCP的检测引物如SEQ ID NO:4~5所示,TaqMan探针序列如SEQ ID NO:6所示。

5.根据权利要求1所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法,其特征在于,所述鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因IRB6的检测引物如SEQ ID NO:7~8所示,TaqMan探针序列如SEQ ID NO:9所示。

6.根据权利要求1所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法,其特征在于,所述荧光定量PCR检测的反应体系为25μl,包括2×Taq PCR Mix 12.5μl,total10uM Primers Mix 1μl,TaqMan探针0.5μl,DNA input 2μl,H2O 9μl。

7.根据权利要求1所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法,其特征在于,所述荧光定量PCR检测的反应条件为95℃预变性2min30s,94℃变性15s,60℃退火30s,采集荧光信号,40个循环。

8.一种用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR试剂盒,其特征在于,包含所述的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因ATPase、MCP和IRB6基因的检测引物和TaqMan探针。

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