[发明专利]用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒荧光定量PCR的方法及相应试剂盒在审
| 申请号： | 201910085184.9 | 申请日： | 2019-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN111485035A | 公开（公告）日： | 2020-08-04 |
| 发明（设计）人： | 唐伟;束文圣;杨荣;束浩然;黄斌;蒋华 | 申请（专利权）人： | 广东美格基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市龙岗区吉华街道甘李*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 鳜鱼 传染性 坏死 病毒 荧光 定量 pcr 方法 相应 试剂盒 | ||
1.用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、收集样品；
S2、提取基因组DNA；
S3、利用荧光定量PCR检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因ATPase、MCP和IRB6基因；
S4、读取扩增Ct值；当所述鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因中至少1个基因的Ct值小于35时，鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的检测结果为阳性；当所述鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因ATPase、MCP和IRB6基因的Ct值均大于35时，鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的检测结果为阴性。
2.根据权利要求1所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法，其特征在于，所述步骤S2中还包括设计ATPase、MCP和IRB6基因的检测引物和TaqMan探针的步骤。
3.根据权利要求2所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法，其特征在于，所述鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因ATPase的检测引物如SEQ ID NO:1～2所示，TaqMan探针序列如SEQ ID NO:3所示。
4.根据权利要求1所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法，其特征在于，所述鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因MCP的检测引物如SEQ ID NO:4～5所示，TaqMan探针序列如SEQ ID NO:6所示。
5.根据权利要求1所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法，其特征在于，所述鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因IRB6的检测引物如SEQ ID NO:7～8所示，TaqMan探针序列如SEQ ID NO:9所示。
6.根据权利要求1所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法，其特征在于，所述荧光定量PCR检测的反应体系为25μl，包括2×Taq PCR Mix 12.5μl，total10uM Primers Mix 1μl，TaqMan探针0.5μl，DNA input 2μl，H2O 9μl。
7.根据权利要求1所述的用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR方法，其特征在于，所述荧光定量PCR检测的反应条件为95℃预变性2min30s，94℃变性15s，60℃退火30s，采集荧光信号，40个循环。
8.一种用于检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，包含所述的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒特异性基因ATPase、MCP和IRB6基因的检测引物和TaqMan探针。
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