[发明专利]一种细胞膜仿生二氧化钛纳米粒的药物组合物

权利要求书

1.一种细胞膜仿生二氧化钛纳米粒的药物组合物的制备方法，其特征在于，中空介孔二氧化钛纳米粒表面通过酰胺化反应共价修饰血红蛋白，然后物理负载NO供体型化疗药物RRx-001，最后与细胞经低渗裂解液和裂解处理、匀浆得到的细胞膜囊泡共挤压，即得细胞膜仿生二氧化钛纳米粒的药物组合物，粒径为140-200nm，具体包括以下步骤：

1）将0.6-1mL的正硅酸四乙酯加到装有0.3-0.5mL超纯水、15-25mL无水乙醇和0.6-1mL氨水的烧瓶中，强烈搅拌10-14h，10000-15000rpm离心10-20min，用无水乙醇洗至中性，得二氧化硅纳米粒；

2）将步骤1）制得的二氧化硅纳米粒分散在10-20mL无水乙醇和0.05-0.15mL超纯水制成的溶液中，然后加入溶于2.5-7.5mL无水乙醇的0.05-0.15g羟丙基纤维素搅拌30min，成混合溶液，将0.5-1.5mL叔丁醇钛溶于2.5-7.5mL无水乙醇后，缓慢滴加到混合溶液中，80-90℃回流90-110min，10000-15000rpm离心10-20min，用无水乙醇洗2-4次，得SiO₂@TiO₂复合物；

3）将步骤2）中制得的SiO₂@TiO₂复合物分散于15-25mL超纯水中，加0.1-0.3gPVPk30，搅拌10-14h，10000-15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀再分散于15-25mL无水乙醇中，加入0.3-0.5mL超纯水、0.6-1mLTEOS和0.6-1mL氨水，磁力搅拌3-5h，10000-15000rpm离心5-10min，用无水乙醇洗至中性，得SiO₂@TiO₂@SiO₂复合物；

4）将步骤3）中制得的SiO₂@TiO₂@SiO₂复合物研磨后，于马弗炉中400℃煅烧2-4h，再分散于30-50mL超纯水中，加1.5-2.5mL2.5M的氢氧化钠溶液，80-90℃回流搅拌6-8h，10000-15000rpm离心5-10min，用超纯水洗至中性，得中空介孔二氧化钛纳米粒；

5）将步骤4）制得的中空介孔二氧化钛纳米粒10-50mg分散于4-20mL无水乙醇，加入80-400μL3-氨丙基三乙氧基硅烷，再加入0.2-1mL超纯水和0.2-1mL氨水，25℃搅拌10-14h，10000-15000rpm离心5-10min，用无水乙醇洗至中性，得氨基化的中空介孔二氧化钛复合物；

6）将5-50mg血红蛋白溶解于10mL溶剂中，加入10-50mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和8-38mgN-羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌30min后，滴入含有步骤5）制得的5mg氨基化的中空介孔二氧化钛复合物的5mL溶剂分散液中，反应4-12h，5000-10000rpm离心5-10min，用超纯水洗至中性，得血红蛋白修饰的中空介孔二氧化钛；所述的血红蛋白为人血红蛋白、牛血红蛋白或重组血红蛋白的一种；所述的溶剂为甲酰胺、PBS、MES的一种；

7）将1mg步骤6）中制得的血红蛋白修饰的中空介孔二氧化钛和0.5-4mgRRx-001分散于5mL甲醇中，25℃下超声2-4h，随即40-50℃旋蒸，挥干甲醇，再加1-2ml甲醇超声2-4s复溶，10000-15000rpm离心5-10min，得血红蛋白修饰的负载RRx-001的二氧化钛药物复合物，RRx-001的载药量为20%～60%；

8）消化收集贴壁细胞，加入低渗裂解液后对细胞进行裂解处理，机械或手动匀浆后，4℃3000-3500g离心5min，收集上清，再于4℃10000-15000g离心20-40min，沉淀加超纯水0.5mL重悬，使用挤压器通过400nm聚碳酸酯膜挤压15-25次，得细胞膜囊泡溶液；再与步骤7）制得的血红蛋白修饰的负载RRx-001的二氧化钛药物复合物通过200nm聚碳酸酯膜共挤压，即得细胞膜仿生二氧化钛纳米粒的药物组合物；所述的细胞为乳腺癌细胞、肝癌细胞、胃癌细胞、肺癌细胞、红细胞、单核细胞、巨噬细胞的一种；所述的低渗裂解液为20mMTris-HCl、10mMKCl、2mMMgCl₂和1mMPMSF的混合液，裂解处理为4℃放置1~3h、液氮和25℃反复冻融2~4次，每次置液氮中3S，25℃融化。