[发明专利]去甲万古霉素修饰的金纳米粒子及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种去甲万古霉素修饰的金纳米粒子及其制备方法与应用，首次使用一种重要的糖肽类大环抗生素—去甲万古霉素(NVC)来实现一步(绿色)合成金纳米粒子。本发明制得的GNPs溶液体系稳定性良好，可在比较宽的pH范围内和较高的盐浓度缓冲液中稳定存在。该纳米粒子体系可用于在磷酸和BR缓冲液中检测半胱氨酸，常见的12种氨基酸对检测无明显干扰，该显色体系在一定浓度范围内线性良好，可以实现对半胱氨酸的定量检测。

技术领域

本发明涉及一种金纳米粒子及其制备方法与应用，特别涉及一种去甲万古霉素修饰的金纳米粒子及其制备方法及其在半胱氨酸检测中的应用。

背景技术

近年来，金纳米粒子(GNPs)因其独特的光学活性、生物相容性和易于修饰等特性，在催化、化学和生物传感器、生物医药和分离科学等领域得到了广泛的关注。金纳米粒子的合成过程主要依赖于化学还原以H[AuCl₄]或[AuCl₄]^-形式存在的Au³⁺。然而，在很长的一段时间内，GNPs的合成广泛使用一些非生物相容性的、非环保的有毒试剂如NaBH₄，对环境不可避免地造成了危害。

为了解决这一问题，研究者陆续提出了各种绿色合成GNPs(或功能化GNPs)的方法。这其中主要包括微生物和细菌、植物提取物、金属复合物、有机分子、有机酸和盐类、脂质体和聚合物等。以上方法尽管在一定程度上成功合成了GNPs，但大多数合成过程得到的是多分散性的和无定形的纳米材料。伴随着电子学、生物学和分离科学等领域对单分散球型GNPs需求的增加，在水相中通过简易、快速的绿色合成方法高效合成粒径和形貌可控的GNPs仍然是一个热门研究领域。

目前，基于金属纳米粒子的可视传感器因为分析方法简单、选择性高和相对价廉，已经引起生物化学分析领域的相当关注。其中，GNPs作为一种独特的金属纳米粒子，由于易于用有机配体修饰且具有稳定的可调控的光学性质，尤为受到关注。因此，基于GNPs的比色检测在近年来被广泛报道，涉及临床医学、生物医药和环境领域包括生物大分子(蛋白质和DNA)、有机分子和无机离子等的分离分析。对于半胱氨酸，目前已经有一些使用GNPs进行比色分析的报道。在这些实验中，为了避免盐诱导GNPs团聚现象的产生，常需要使用一些辅助试剂如溴化十六烷基三甲铵(CTAB)和特异的DNA分子来保持GNPs的稳定。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种去甲万古霉素(NVC)修饰的金纳米粒子及其制备方法与应用，克服现有技术中使用GNPs进行比色分析GNPs稳定性差的问题。

本发明的技术方案是：

一种去甲万古霉素修饰的金纳米粒子，由以下方法制得：

(1)将注射用盐酸去甲万古霉素粉末溶于水中得到无色澄清透明的水溶液，加入氢氧化钠溶液调节至其等电点7.0～7.2，或在搅拌下逐滴加入氢氧化钠，直到溶液中白色沉淀不再增加为止，将溶液在3～5℃冰箱静置过夜；过滤溶液，得到析出的去甲万古霉素，冷冻干燥得到纯去甲万古霉素白色粉末；

(2)在三颈瓶中，将HAuCl₄水溶液与NVC水溶液在磁力搅拌下混合，混合溶液的pH用0.1～1.0M的氢氧化钠调节至8.0～8.2，油浴升温至50～100℃进行反应直到溶液呈现红色；

(3)将步骤(2)制得的金纳米粒子转入到离心管中，高速离心机中离心10～20min，倾去上清液，将离心管底部的金纳米粒子沉淀加入适量的蒸馏水在超声波清洗器中分散，重复以上过程3～5次直到上清液在UV-vis谱中没有明显的NVC的吸收。

所述步骤(2)HAuCl₄水溶液与NVC水溶液摩尔浓度之比为1:0.02～1:2。

一种去甲万古霉素修饰的金纳米粒子的制备方法，包括以下步骤：