[发明专利]液固双相发酵生产枯草芽孢杆菌菌剂的方法

权利要求书

1.一种液固双相发酵生产枯草芽孢杆菌菌剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将活化后的枯草芽孢杆菌菌株接种于种子培养基中，进行摇床培养，得种子液；

S2、将所述种子液接种于发酵罐深层的液体发酵培养基中，进行发酵培养，得到液体发酵产物；所述液体发酵培养基配方为：8～14g/L玉米粉、10～25g/L黄豆粉、1～4g/L NaCl、0.5～1.5g/L KH₂PO₄、0.5～2g/L K₂HPO₄、1～5g/L MgSO₄·7H₂O、1～5g/L CaCO₃、初始pH6.5～7.5；

S3、将液体发酵产物接种于多孔性浅盘固体发酵培养基中，进行浅盘固体发酵，得到枯草芽孢杆菌发酵物；所述浅盘固体发酵培养基配方为：50～85份麦麸、4～15份豆粕粉、5～15份棉籽粕、3～10份玉米秸秆粉、3～10份谷壳、1～5份糖蜜、0.1～0.5份(NH₄)₂SO₄、0.5～2份MgSO₄·7H₂O、0.02～0.06份MnSO₄，调节水分至55～70％；

S4、将所述枯草芽孢杆菌发酵物通风干燥后粉粹即得枯草芽孢杆菌菌剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S1中，所述种子培养基为YPD种子培养基；

和/或，所述摇床培养具体为：36℃、160r·min^-1摇床培养16h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S2中，所述种子液的接种量为1～3v/v％。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S2中，所述发酵罐深层液体发酵条件为：装料系数0.5～0.6、罐压0.06Mpa，温度30～36℃，通气量为0.5～1.5vvm、转速为160～200r/min，发酵时间16h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S3中，所述液体发酵产物的接种量为20～30v/w％；

和/或，所述浅盘固体发酵的具体过程为：在无菌操作台上，用无菌不锈多孔钢盘分装已灭菌的固体发酵培养基，堆料厚度约3～5cm，同时接入所述液体发酵物并混匀，然后将接种后固体培养基置于固体培养箱中，培养温度30～36℃，在培养过程中每隔1天翻动一次培养基，发酵时间72h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S4具体为：将所述枯草芽孢杆菌发酵物在温度不高于50℃的条件下通风干燥，使含水量控制在20％以下，然后粉粹即得枯草芽孢杆菌菌剂。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述S2中，所述液体发酵培养基配方为：9～12g/L玉米粉、13～18g/L黄豆粉、2～3.5g/L NaCl、0.6～1.2g/L KH₂PO₄、1～2g/L K₂HPO₄、2～4g/L MgSO₄·7H₂O、2～4g/L CaCO₃、初始pH 6.5～7.5。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述S2中，所述液体发酵培养基配方为：10g/L玉米粉、15g/L黄豆粉、3g/L NaCl、1g/L KH₂PO₄、1.5g/L K₂HPO₄、3.5g/LMgSO₄·7H₂O、3g/L CaCO₃、初始pH 7.0±0.2。