[发明专利]中华鳖ZW性染色体型微创快速鉴定PCR引物组、位点、方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201910091887.2 | 申请日： | 2019-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN109652563B | 公开（公告）日： | 2019-10-18 |
| 发明（设计）人： | 许晓军;张海琪;朱凝瑜;孟庆辉 | 申请（专利权）人： | 浙江省水产技术推广总站 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州君度专利代理事务所(特殊普通合伙) 33240 | 代理人： | 朱亚冠 |
| 地址： | 310023 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 中华鳖 性染色体 扩增产物 微创 快速鉴定 试剂盒 条带 位点 生长发育阶段 引物组序列 单性养殖 电泳检测 快速检测 起始材料 起始模板 染色体型 微量血液 重要工具 引物组 取样 存活 损伤 采集 育种 血液 检测 健康 | ||
1.一种中华鳖ZW性染色体型鉴定PCR引物组，其特征在于该引物组序列如下：
正向引物：5’-TGGTGCTGTRAAGAAGGMRRCT-3’，见SEQ ID No.1；
反向引物：5’-TTCTTCATCTTCCTCCTCRGGT-3’，见SEQ ID No.2。
2.一种微创快速鉴定中华鳖ZW性染色体型的分子方法，其特征在于利用权利要求1所述的引物对待检中华鳖样本进行PCR扩增，然后将扩增产物进行电泳检测，当扩增产物出现2031bp大小的条带时，中华鳖性染色体型为ZZ型，即遗传学雄性；当扩增产物出现2031bp和1624bp大小的条带时，中华鳖性染色体型为ZW型，即遗传学雌性。
3.如权利要求2所述的一种微创快速鉴定中华鳖ZW性染色体型的分子方法，其特征在于PCR扩增反应体系为：
PCR扩增条件是：94℃预变性5min,94℃变性30s,62℃退火30s,72℃延伸100s，变性到延伸过程35个循环，最后72℃延伸5min。
4.一种微创快速鉴定中华鳖ZW性染色体型的分子方法，其特征在于
步骤(1)、采用PicoPureTM DNA Extraction Kit的蛋白酶K进行样本裂解：
样本裂解体系包括中华鳖全血0.5-1μL，1ug/μL蛋白酶k溶液10-10.5μL；总体积为11μL；
步骤(2)、利用权利要求1所述的引物对步骤1样本裂解混合液进行PCR扩增；
步骤(3)、待扩增完成后，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分离并凝胶成像，当扩增产物出现2031bp大小的条带时，中华鳖性染色体型为ZZ型，即遗传学雄性；当扩增产物出现2031bp和1624bp大小的条带时，中华鳖性染色体型为ZW型，即遗传学雌性。
5.如权利要求4所述的一种微创快速鉴定中华鳖ZW性染色体型的分子方法，其特征在于步骤(1)中华鳖全血的采样方式包括以下两种：
一是初孵稚鳖未脱落卵黄囊内存留微量血液；
二是稚鳖、成鳖后肢皮肤针刺微创采集微量血液。
6.如权利要求4所述的一种微创快速鉴定中华鳖ZW性染色体型的分子方法，其特征在于步骤(1)裂解条件为65℃裂解30min，95℃灭活10min。
7.如权利要求4所述的一种微创快速鉴定中华鳖ZW性染色体型的分子方法，其特征在于步骤(2)PCR扩增体系包括如下：
PCR扩增条件是：94℃预变性5min,94℃变性30s,62℃退火30s,72℃延伸100s，变性到延伸过程35个循环，最后72℃延伸5min。
8.一种中华鳖ZW性染色体型微创快速鉴定试剂盒，其特征在于包括SEQ ID No.1、SEQID No.2所示引物。
9.一种用于鉴定中华鳖ZW性染色体型的位点，其特征在于Z性染色体特异连锁片段2031bp，序列见SEQ ID No.3；W性染色体特异连锁片段1624bp，序列见SEQ ID No.4。
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