[发明专利]硝化菌属细菌的检测方法及试剂盒

权利要求书

1. 硝化菌属细菌的检测试剂盒，其特征在于：包含序列如SEQ ID NO:1～3所示的探针1～3，所述探针1用FAM标记，探针2用HEX标记；所述探针2和3同时使用。

2.根据权利要求1所述的硝化菌属细菌的检测试剂盒，其特征在于：所述探针1的序列为5’-CGATCGCAGCTTTTCTCC-3’，在5’-端用FAM标记；探针2的序列为5’-CCTGTGCTCCATGCTCCG-3’，5’-端用HEX标记；探针3的序列为5’-CCTGTGCTCCAGGCTCCG-3’。

3.根据权利要求1所述的硝化菌属细菌的检测试剂盒，其特征在于：所述探针的浓度为80-110ng/μL。

4.硝化菌属细菌的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

a,玻片预处理；

b,样品预处理；

c,杂交反应；

d,检测。

5.根据权利要求4所述的硝化菌属细菌的检测方法，其特征在于：所述玻片预处理的方法为：将玻片依次进行一般处理、硅化处理后，用明胶包埋，所述明胶的温度保持在55-65℃。

6.根据权利要求5所述的硝化菌属细菌的检测方法，其特征在于：所述明胶溶液的配置方法为：将明胶溶于重蒸水中，加热搅拌，加入明矾，再依次加入芦丁和7-羟基黄酮醇，溶解后稀释，备用；所述明胶和重蒸水的配比为1:500-800（g/mL）；所述明矾用量为混合液质量分数的0.3-0.5%；所述芦丁和7-羟基黄酮醇的用量分别为混合液质量分数的0.001-0.002%和0.01-0.1%。

7.根据权利要求4所述的硝化菌属细菌的检测方法，其特征在于：所述样品预处理包括如下步骤：

（）取样：将活性污泥生物膜样品涂布在预处理后的玻片上；

（）固定：取样品于涂有明胶粘附剂的玻片上，室温干燥3-5min，采用3-5%多聚甲醛室温下固定15-25min，用PBS室温冲洗2-3次，每次3-5min，自然风干；

（）脱水：将固定后的样品，在50-100%乙醇中室温下脱水2-5min，自然风干。

8.根据权利要求4所述的硝化菌属细菌的检测方法，其特征在于：所述杂交方法为：取探针和杂交液充分混合，将混合液点到预处理过的样品处，放入黑暗湿盒中，40-48℃杂交2-3h；杂交后的玻片置于清洗液中，于45-52℃浸泡15-25min；然后室温下用重蒸水冲洗2-3次；自然风干。

9.根据权利要求4所述的硝化菌属细菌的检测方法，其特征在于：所述检测是通过数字荧光显微镜。

10. SEQ ID NO:1～3所述的寡核苷酸序列的用途，其特征在于：用于检测来自污泥的硝化菌属细菌。