[发明专利]一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法

说明书

本发明提供了一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法，检测方法包括以下步骤：（1）乙醛酸上的羧基与生物素进行连接，制得生物素修饰的乙醛酸，作为氨基残留物检测的通用中间体；（2）制备氨基残留物抗体修饰的磁性粒子和质控抗体修饰的磁性粒子；（3）生物素修饰的乙醛酸与氨基残留物反应，并与氨基残留物抗体修饰的磁性粒子孵育后，通过磁分离洗涤制得待检测物；将质控抗体修饰的磁性粒子与上述待检测物进行混合，制得混合检测物；（4）试纸条组装与免疫层析检测。该方法实现了组织样本中氨基残留物的分离，简化了目标物的分离纯化步骤，并且通过信号放大效应，提高了目标物检测的灵敏度。

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法。

背景技术

目前对食品中主要污染—化学残留污染物的检测，尤其是对农/兽药残留的检测技术包括两个方向：一个是基于免疫学方面的快速筛选检测技术，包括ELISA检测试剂盒、胶体金检测试纸条、免疫传感器等；另一个是气相色谱法和液相色谱法等以仪器为主的确证检测方法。但是仪器检测方法所需仪器昂贵、样品前处理时间较长，与检验检疫的快速通关需求非常不适应，并且不适于现场监测。特别是随着农/兽药残留检测项目的增加，完全使用仪器进行农/兽药残留检测根本不现实。因而免疫分析方法以其快速、简便、灵敏的优点承载了食品安全检测的重任。

虽然现有的试纸条检测方法能够满足现场快速检测的需求，然而，随着人们对食品安全关注程度的逐渐提高，食品安全意识的增强，对食品安全检测的要求越来越高，因此更加需要高灵敏的检测方法，从而检测更低含量的有害目标物。同时要求节省样品前处理环节的操作时间和操作程序，为后续的检测步骤带来更大的便利。

发明内容

为了解决以上现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法，简化样品前处理效率，提高目标物检测灵敏度。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

一种适用于氨基残留物检测的高灵敏免疫层析方法，包括以下步骤：

（1）乙醛酸上的羧基与生物素进行连接，制得生物素修饰的乙醛酸，作为氨基残留物检测的通用中间体；

（2）制备氨基残留物抗体修饰的磁性粒子和质控抗体修饰的磁性粒子；

（3）生物素修饰的乙醛酸与氨基残留物反应，并与步骤（2）制得的氨基残留物抗体修饰的磁性粒子在室温下孵育，通过磁分离去除上清并使用磷酸盐缓冲液分离洗涤，最后一次洗涤完成后将磁性粒子再次用磷酸盐缓冲液重悬，再次重悬后的溶液即为待检测物；将质控抗体修饰的磁性粒子再与上述待检测物进行混合，制得混合待检测物；

（4）以底板、样品垫、层析膜、吸水垫和外壳构建成免疫层析试纸条，层析膜上设有检测线和质控线，检测线上固定有链霉亲和素，质控线上固定有识别质控抗体的二抗，所述层析膜、底板和外壳均没有荧光特性；

（5）将混合待检测物滴加于试纸条的样品垫处，进行免疫层析，当混合检测液流经检测线和质控线后，检测线和质控线的位置将会出现指示信号，根据检测线的信号强度，实现目标物的定量检测。

进一步的，所述生物素为氨基聚乙二醇生物素，生物素通过氨基与乙醛酸的羧基相连接。

进一步的，所述氨基残留物包括金刚烷胺、磺胺类、克仑特罗、或抗生类，所述磺胺类包括磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑或磺胺喹恶啉，所述抗生类包括庆大霉素、卡那霉素、安普霉素、链霉素或新霉素。

进一步的，所述磁性粒子为羧基、氨基或者羟基修饰的磁纳米粒子或金包磁纳米粒子。

进一步的，所述质控抗体为与残留物抗体不产生交叉反应的抗体。