[发明专利]构建一株表达副猪嗜血杆菌Omp26基因的猪霍乱减毒沙门菌重组菌株

权利要求书

1.一种扩增Omp 26基因的引物对，其特征在于：

所述引物对包括引物1和引物2；

所述引物1的核苷酸序列如序列表中序列1所示；

所述引物2的核苷酸序列如序列表中序列2所示。

2.权利要求1所述的引物对在扩增Omp 26基因中的应用。

3.一种重组载体，其特征在于：

所述重组载体是将Omp 26基因插入无抗性质粒载体pYA3493的EcoR I和Hind III酶切位点间构建得到。

4.一种权利要求3所述的重组载体的构建方法，其特征在于，包括步骤：

提取副猪嗜血杆菌5型SH0165菌株的DNA，然后采用权利要求1所述的引物对扩增Omp26基因，将扩增得到的PCR产物进行胶回收和纯化，之后与pMD18-T载体连接，得到连接产物；将所述连接产物转入感受态细胞DH-5α中，经酶切鉴定，筛选阳性克隆并进行序列测定，得到pMD18-T-Omp 26；

用EcoR I和Hind III同时酶切无抗性质粒载体pYA3493和pMD18-T-Omp 26，将酶切产物连接构建得到pYA3493(+)-Omp 26表达载体。

5.权利要求4所述的重组载体在制备Omp 26蛋白中的应用。

6.权利要求4所述的重组载体在动物细菌性疾病基因工程疫苗技术领域中的应用。

7.一种副猪嗜血杆菌外膜蛋白基因Omp 26重组猪霍乱减毒沙门氏菌株，其特征在于：

所述菌株是将权利要求3所述的重组载体转入猪霍乱沙门氏菌asd基因缺失株C500Δasd中构建得到。

8.一种权利要求7所述的副猪嗜血杆菌外膜蛋白基因Omp 26重组猪霍乱减毒沙门氏菌株的构建方法，其特征在于，包括步骤：

构建猪霍乱沙门氏菌asd基因缺失株C500Δasd；然后将权利要求3所述的重组载体电转入所述猪霍乱沙门氏菌asd基因缺失株C500Δasd中，之后培养，待平皿表面有菌落长出后进行双酶切、PCR鉴定及测序，结果均证明所得为阳性pYA3493(+)-Omp 26质粒，得到所述副猪嗜血杆菌外膜蛋白基因Omp 26重组猪霍乱减毒沙门氏菌株C501Δasd pYA3493-Omp26。

9.权利要求8所述的副猪嗜血杆菌外膜蛋白基因Omp 26重组猪霍乱减毒沙门氏菌株在制备Omp 26蛋白中的应用。

10.权利要求8所述的副猪嗜血杆菌外膜蛋白基因Omp 26重组猪霍乱减毒沙门氏菌株在动物细菌性疾病基因工程疫苗技术领域中的应用。