[发明专利]一种微藻细胞总RNA的提取方法

权利要求书

1.一种微藻细胞总RNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将2～6mL藻液离心浓缩收集的微藻细胞置于2mL离心管中；加入0.5～1.0mL植物RNA提取辅助液和0.3～0.8g石英砂，振荡破碎细胞后离心，收集上清液，用于后续的RNA提取。

2.根据权利要求1所述的微藻细胞总RNA的提取方法，其特征在于：

还包括如下步骤：

(2)将上清液置于1.5mL离心管中，加入0.5mL Trizol混匀，加入200μL氯仿，剧烈振荡，待溶液充分乳化后，离心，上清液转移至新的1.5mL离心管中；

(3)加入等体积异丙醇，0.8～1μL核酸助沉剂，上下颠倒离心管充分混匀后，室温静置，离心，弃上清；

(4)加入75％乙醇，上下颠倒离心管充分混匀后，离心，弃上清，室温干燥，加入20～30μL的RNase-free水溶解沉淀，得到总RNA。

3.根据权利要求1或2所述的微藻细胞总RNA的提取方法，其特征在于：

所述的微藻包括但不限于Chlorella sacchrarophila、Chlorella pyrenoidosa、Scenedesmus obliquus、Chlamydomonas reinhardtii和Chlorella luteorividis中的至少一种。

4.根据权利要求2所述的微藻细胞总RNA的提取方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的藻液的体积为4mL；

步骤(1)中，加入0.5mL植物RNA提取辅助液和0.5g石英砂；

步骤(3)中所述的核酸助沉剂的用量为1μL。

5.根据权利要求1或2所述的微藻细胞总RNA的提取方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的离心浓缩的转速为10000～12000rpm；

步骤(1)中所述的石英砂的大小为5～20目；

步骤(1)中所述的振荡的时间为3～8min；

步骤(1)中所述的振荡破碎细胞后离心的条件为10000～12000rpm离心1min。

6.根据权利要求5所述的微藻细胞总RNA的提取方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的离心浓缩的转速为12000rpm；

步骤(1)中所述的石英砂的大小为10目；

步骤(1)中所述的振荡的时间为5min；

步骤(1)中所述的振荡破碎细胞后离心的条件为12000rpm离心1min。

7.根据权利要求2所述的微藻细胞总RNA的提取方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的离心的条件为10000～12000rpm离心1min；

步骤(3)中所述的室温静置的时间为8～10分钟；

步骤(3)中所述的离心的条件为10000～12000rpm离心2min。

8.根据权利要求7所述的微藻细胞总RNA的提取方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的离心的条件为12000rpm离心1min；

步骤(3)中所述的室温静置的时间为10分钟；

步骤(3)中所述的离心的条件为12000rpm离心2min。

9.根据权利要求2所述的微藻细胞总RNA的提取方法，其特征在于：

步骤(4)中所述的75％乙醇的用量为0.8～1mL；

步骤(4)中所述的离心的条件为10000～12000rpm离心1min；

步骤(4)中所述的室温干燥的时间为2～5min。

10.根据权利要求9所述的微藻细胞总RNA的提取方法，其特征在于：

步骤(4)中所述的75％乙醇的用量为1mL；

步骤(4)中所述的离心的条件为12000rpm离心1min；

步骤(4)中所述的室温干燥的时间为2min。