[发明专利]一种微藻细胞总RNA的提取方法

说明书

本发明公开一种微藻细胞总RNA的提取方法。本发明通过将微藻置于含有石英砂的植物RNA提取辅助液中进行研磨，实现了一步快速完成微藻的研磨与去多糖处理，对微藻菌体量的需求大大降低，大大简化了实验操作，降低实验耗时。本发明将微藻细胞壁的破碎与多糖的去除相结合，可在5min内完成细胞破壁与多糖去除，通过整体提取方法的创新与改良，使得微藻RNA提取时间缩短至30min以内，在此基础上，实现了微藻RNA提取的所有操作可在一般实验室环境中进行，无需去除RNA酶的特殊提取环境。实验用品也均无需DEPC水去RNA酶处理。在减轻前期准备工作的同时免去了DEPC水对研究人员健康的损害，保护了实验人员的安全。

技术领域

本发明属于RNA提取领域，具体涉及了一种微藻细胞总RNA的提取方法。

背景技术

微藻是一类含有叶绿素，能进行光合作用自养生长的一类微小生物的总称。由于其细胞富含藻多糖、蛋白质、脂肪酸等营养物质，而其又具有可以利用光合作用快速生长等特点而受到人们的广泛关注，在食品、保健、医疗等领域有着广阔的应用前景。微藻也由于其光合效率高、生长周期短、油脂含量高以及微藻生物柴油的物理和化学特性与传统柴油相似等特点，成为第三代生物柴油，作为现在最有希望实现工业化的生物柴油。

微藻虽然具有很高的价值和良好的应用前景，但是其实现工业化的产品却很少，其中一个很重要的原因是其基础研究的薄弱。基于微藻RNA的功能基因相对荧光定量分析，转录组测序及分析在微藻的基础及前沿研究中扮演了非常重要的作用。而微藻RNA提取的便捷性也直接影响到整体实验工作的进展速度。但是目前关于微藻RNA的提取仍存在几个问题：

1，微藻RNA提取时样品量需求量大：传统微藻RNA提取第一步通常是液氮研磨，所以较大的样品量，使得动态监测微藻RNA水平变得困难。

2，微藻多糖严重影响RNA提取：藻细胞中富含藻多糖，而多糖会在微藻破壁后结合RNA一起沉淀，使得RNA的提取质量严重下降，而且微藻培养到后期其多糖的含量增加，更加增加了RNA提取的困难。

3，DEPC水的危害：一般提取RNA时，所有的实验用品，实验产所都要经过DEPC水去RNA酶处理，而DEPC水是致癌的，严重影响研究者的人身安全。

4，微藻RNA提取耗时长：由于提取微藻RNA的所有实验用品、工作台要经过去RNA酶处理，微藻要液氮研磨，Trizol提取RNA的基础耗时等因素的影响，使得一般的微藻RNA提取方法耗时长，一方面会影响RNA的得率及完整性，另一方面更不利于整体实验的顺利开展。

因此，研究一种安全、有效、快速的微藻细胞总RNA提取方法，对微藻的研究有着重要的意义。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种微藻细胞总RNA的提取方法。该方法具有安全、有效、快速的特点。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种微藻细胞总RNA的提取方法，包括如下步骤：

(1)将2～6mL藻液离心浓缩收集的微藻细胞置于2mL离心管中；加入0.5～1.0mL植物RNA提取辅助液和0.3～0.8g石英砂，振荡破碎细胞后离心，收集上清液，用于后续的RNA提取；

还包括如下步骤：

(2)将上清液置于1.5mL离心管中，加入0.5mL Trizol混匀，加入200μL氯仿，剧烈振荡，待溶液充分乳化后，离心，上清液转移至新的1.5mL离心管中；

(3)加入等体积异丙醇，0.8～1μL核酸助沉剂，上下颠倒离心管充分混匀后，室温静置，离心，弃上清；

(4)加入75％乙醇，上下颠倒离心管充分混匀后，离心，弃上清，室温干燥，加入20～30μL的RNase-free水溶解沉淀，得到总RNA。