[发明专利]一种机体免疫功能评价的试剂盒及其使用方法和应用

权利要求书

1.一种机体免疫功能评价试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括Toll样受体激动剂、抗人CD3抗体和CD28抗体、以及CD40配体、B细胞活化因子、IL-21和IL-4。

2.根据权利要求1所述机体免疫功能评价试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中Toll样受体激动剂包括但不限于TLR1/2激动剂、TLR4激动剂、TLR9激动剂；上述激动剂可单独使用，也可联合使用。

3.根据权利要求1所述机体免疫功能评价试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中抗人CD3抗体和CD28抗体是包被在磁珠或培养皿上进行使用的。

4.根据权利要求2所述机体免疫功能评价试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中TLR1/2激动剂包括但不限于 LPS-PG 、 LTA-SA standard 、 PGN-SA 或Pam3CK4； TLR4激动剂包括但不限于LPS; TLR9激动剂包括但不限于ODN 2216、ODN2206、ODN2243或ODN2395。

5.根据权利要求1所述机体免疫功能评价试剂盒，其特征在于，所述试剂盒在评价人体免疫功能时，评价指标分三类，其中Toll样受体激动剂用于评价天然免疫，其评价指标为:IL-6、IL-10、IFN-α；抗人CD3和CD28抗体用于评价T淋巴细胞功能，评价指标为：IL-2、IL-4、IL-17a、IFN-γ；CD40配体、B细胞活化因子、IL-21和IL-4用于评价B淋巴细胞功能，评价指标为：IgG1、IgG2。

6.根据权利要求1所述机体免疫功能评价试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中CD40配体、B细胞活化因子、IL-21和IL-4是通过转染了CD40L、BAFF、IL-21和IL-4基因的K562细胞分泌获得。

7.采用权利要求1-6所述机体免疫功能评价试剂盒对机体免疫功能进行评价的方法，其步骤如下：

固有免疫的评价：

（1）取待评价机体分离的PBMC培养于细胞培养板中；

（2）在细胞中加入TLR1/2激动剂、TLR4 激动剂、TLR9激动剂，放置二氧化碳培养箱培养；

（3）收集培养上清，检测培养上清中IL-6、IL-10、IFN-α的表达，使用流式细胞仪检测细胞因子的浓度；通过检测这些细胞因子产生的量来评价机体免疫功能；

二、T细胞免疫的评价：

（1）分离待评价机体的PBMC培养于细胞培养板中；

（2）在细胞中加入抗人CD3抗体和抗人CD28抗体，放置二氧化碳培养箱培养；

（3）收集培养上清；检测培养上清中IL-2、IL-4、IL-17、IFN-γ的表达，使用流式细胞仪检测细胞因子的浓度；通过检测这些细胞因子产生的量来评价机体免疫功能；

三、B细胞分泌抗体能力的评价：

（1）分离待评价机体的PBMC培养于细胞培养板中；

（2）在细胞中加入CD40L、BAFF、IL-21和IL-4，放置二氧化碳培养箱培养24h；

（3）收集培养上清；检测培养上清中IgG1、IgG2的分泌量，使用流式细胞仪检测IgG的浓度，通过检测IgG产生的量来评价机体免疫功能。

8.根据权利要求7所述采用机体免疫功能评价试剂盒对机体免疫功能进行评价的方法，其固有免疫的评价方法具体步骤如下：（1）取分离的PBMC放置96孔U底细胞培养板中，2×10⁵细胞/孔，设置复孔；（2）在细胞中加入TLR1/2激动剂Pam3CSK4100ng/ml、TLR4 激动剂LPS 100ng/ml、TLR9激动剂ODN 22162.5μM，100ul培养体系，放置二氧化碳培养箱培养24h；（3）收集培养上清，使用细胞因子检测试剂盒按照操作说明检测培养上清中IL-6、IL-10、IFN-α的表达，使用流式细胞仪检测细胞因子的浓度，通过检测这些细胞因子产生的量来评价机体免疫功能。