[发明专利]一种机体免疫功能评价的试剂盒及其使用方法和应用

说明书

本发明建立了一种机体免疫功能评价试剂盒及其及其使用方法和应用，该试剂盒使用Toll样受体激动剂刺激外周血单个核细胞，以IL‑6、IL‑10、IFN‑α为指标评估机体固有免疫反应；使用抗人CD3抗体和抗人CD28抗体刺激外周血单个核细胞后，以IL‑2、IL‑4、IL‑17a、IFN‑γ为指标评估机体T淋巴细胞反应；使用CD40L/BAFF/IL‑21/IL‑4蛋白刺激单个核细胞，以IgG1、IgG2评估机体B细胞分泌抗体能力。所有检测指标使用流式细胞仪进行检测。本发明中多指标联合应用，可以比较全面的评价机体的免疫细胞功能。本试剂盒操作简单，能够同时进行多份样本的评价。

技术领域

本发明属于医药生物学领域，具体涉及一种体外评价人体免疫功能的试剂盒及其使用方法和应用。

背景技术

免疫系统由固有免疫和获得性免疫系统组成。固有免疫是抵抗外来病原体的第一道防线，包括多种效应细胞和分子，如各种粒细胞、单核/巨噬细胞、树突状细胞( DC)、 NK细胞和体液杀菌成分如补体、抗微生物肽、溶菌酶等，能够对病原体产生快速非特异性的免疫应答。获得性免疫是在个体发育过程中通过细胞超家族基因重排而产生的抗原识别细胞，主要包括T淋巴细胞和B淋巴细胞，对非己抗原发生反应，同时产生免疫记忆。

固有免疫的本质是识别病原生物所特有的保守性分子模式，即病原相关分子模式（pathogen-associatedmolecular pattern，PAMP）。模式识别受体是固有免疫应答中最具代表性的受体，能够识别并结合PAMP，可使宿主细胞区分自己和非己，激活与固有免疫相关的信号转导通路。Toll样受体（TLR）是常见的模式识别受体，在识别侵入的病原、早期启动机体的固有免疫反应、诱导多种炎症介质和细胞因子的产生有着重要的作用。

获得性免疫即抗原特异性T淋巴细胞和B淋巴细胞对自身正常组织细胞产生天然免疫耐受，对非己抗原性异物产生免疫排斥反应，机体接受某种抗原刺激后，只能产生对该种抗原特异性的免疫应答，抗体和效应T细胞只能对该种抗原和表达此种抗原的靶细胞产生作用，在抗原特异性T、B淋巴细胞增殖分化阶段，有部分T、B淋巴细胞分化成免疫记忆细胞，当机体再次接触相同抗原时，这些免疫记忆细胞可迅速增殖分化为免疫效应细胞，产生相应体液或细胞免疫效应。

目前有多种评价机体免疫功能的方法，如检测细胞亚群比例及绝对计数、血清抗体测定、中性粒细胞趋化功能试验、白细胞吞噬功能试验、抗体依赖性细胞毒性试验等，但是这些方法分类较多，每项只能反应一个指标，多项测试耗费人力物力，因此急需一项多指标综合评价免疫功能的手段，以便更好的评价机体的免疫功能。此外，随着对机体免疫系统的深入了解以及生物技术的迅速发展，免疫治疗已经成为肿瘤治疗的重要手段。评价免疫治疗后机体的免疫功能对科学评价免疫治疗的疗效有重要的意义。目前缺乏标准化的免疫治疗患者免疫功能评价的方法。

本发明采用的技术方案是：分离外周血单个核细胞，使用TLR激动剂、抗人CD3抗体和抗人CD28抗体包被的磁珠以及转染了CD40L/BAFF/IL-21/IL-4的K562细胞刺激单个核细胞，用于评估机体免疫反应。

本发明所述的评价方法操作简单，用时短，便于规模化评价。

本发明建立的评价方法可以用于健康人、细菌及病毒感染患者、肿瘤患者以及自身免疫性疾病患者等人的机体免疫状态评估。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、快速、多指标联合评估机体免疫功能的试剂盒。该试剂盒可以用于健康人、感染病人、癌症病人的免疫功能评价。

为解决上述技术问题：本发明提供一种机体免疫功能评价试剂盒，所述试剂盒包括Toll样受体激动剂、抗人CD3抗体和CD28抗体、以及CD40配体、B细胞活化因子、IL-21和IL-4。

进一步的，所述试剂盒中Toll样受体激动剂包括但不限于TLR1/2激动剂、TLR4激动剂、TLR9激动剂；上述激动剂可单独使用，也可联合使用。