[发明专利]一种快速的基于Ct值的从多种近似种中鉴别褐飞虱的引物、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201910104550.0 | 申请日： | 2019-02-01 |
| 公开（公告）号： | CN109628615A | 公开（公告）日： | 2019-04-16 |
| 发明（设计）人： | 刘淑华;唐健;周明好;杨保军;王爱英;罗举 | 申请（专利权）人： | 中国水稻研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 | 代理人： | 张晓红 |
| 地址： | 310006 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 褐飞虱 试剂盒 重组质粒 引物 质控 特异性引物 预测预报 害虫 检测 鉴别 准确度 快速鉴定 扩增模板 人力物力 质控质粒 组织液 近似 样本 水稻 基层 | ||
1. 一种用于鉴定褐飞虱的特异性引物对，其特征在于包括上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1，上游引物Nl-Its1-F1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物Nl-Its1-R1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
2. 一种用于鉴定褐飞虱的质控重组质粒，其特征在于其DNA序列如SEQ ID No.3所示。
3. 一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒，其特征在于包括：1）特异性引物对，上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1，上游引物Nl-Its1-F1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物Nl-Its1-R1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；2）质控重组质粒，其DNA序列如SEQID No.3所示；3）PCR反应液，所述的PCR反应液包含2×Reaction Buffer Mix、ddH2O。
4. 如权利要求3所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒，其特征在于反应体系包括2×Reaction Buffer Mix 5μL，ddH2O 2.8μL，浓度为10pmol/μL的上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1各0.1μL，浓度为20×10-6ng/μL的质控重组质粒2μL或样本粗组织液2μL。
5.如权利要求3所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒，其特征在于质控重组质粒的使用浓度为4×10-6ng/μL。
6.采用权利要求3所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取待测飞虱单头个体，用蒸馏水制备样本粗组织液；
2）制备含上述2条特异引物的荧光定量PCR扩增体系，以质控重组质粒P作为临界模板；
3）将上述PCR反应液上机进行扩增；
4）结果分析。
7. 如权利要求6所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤1）中样本粗组织液的具体制备方法为：取单头待测样本放入1.5ml离心管中，再加入500μLddH2O研磨，手动研磨或自动研磨机研磨，自动研磨机的参数为5HZ，90s。
8. 如权利要求6所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤2）扩增体系中，各组分的具体比例为：2×Reaction Buffer Mix 5μL，ddH2O 2.8μL，浓度为10pmol/μL的上游引物Nl-Its1-F1和下游引物Nl-Its1-R1各0.1μL，浓度为20×10-6ng/L的质控重组质粒2μL或样本粗组织液2μL，用ddH2O补足10μL。
9. 如权利要求6所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤3）扩增条件中：具体为95℃、50 s，60℃、25s，共30个循环。
10.如权利要求6所述的一种用于鉴定褐飞虱的试剂盒的检测方法，其特征在于步骤4）结果分析中：根据Ct值的大小判断，当样本的CtS小于质控质粒P的CtP值时，则为褐飞虱，反之则不是褐飞虱。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国水稻研究所，未经中国水稻研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910104550.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
