[发明专利]一种复合益生菌肠道靶向控释体系及其制备方法

说明书

本发明公开了一种复合益生菌肠道靶向控释体系及其制备方法，益生菌菌种活化，蓝靛果多糖的制备，构建多元复合物控释体系，益生菌包埋。将得到的体系溶液不断搅拌，冷却到室温，然后在冰浴环境下降低温度为5℃，加入固化剂CaCl₂溶液后持续搅拌待沉淀析出，离心后过滤收集，用灭菌的生理盐水洗涤微球，得到湿胶囊。本发明不仅拥有蛋白质的疏水自组装特性，而且具备多糖良好的水溶性，可以用来包埋和输送复合益生菌形成肠道靶向控释体系，大分子的空间位阻效应可有效抑制颗粒间的聚集、沉降，并且具有良好的生物相容性、较强的抗压、抗热能力及环境适应性，实现益生菌在结肠部位的靶向释放。

技术领域

本发明涉及一种功能食品，尤其涉及的是一种复合益生菌肠道靶向控释体系及其制备方法。

背景技术

益生菌是一类对人体有益的活性微生物，能够在人体的肠道内定植并生长繁殖，调节人体肠道菌群，维持人体肠道内的微生态平衡，从而促进人体健康，预防疾病。但是益生菌对外界环境比较敏感，人体内低pH的胃酸和胆汁等不利条件会严重影响益生菌的活性，导致益生菌进入肠道内的活菌数减少，影响其定植并发挥益生功效。

目前，国内外大多通过单一的大分子载体来构建运载体系，如利用一些大豆分离蛋白、糊化玉米淀粉，明胶等作为载体，制备微胶囊或纳米微胶囊、纳米乳状液、纳米脂质体、微球和聚合物纳米粒子等对益生菌进行包埋和装载，实现益生菌在体内的运输。然而，益生菌对环境比较敏感，在制备纳米乳液等载体系统的过程中，需要严格控制制备条件如温度、氧气、光照及过渡态金属等，而且其与不同聚合物电解质间的作用力及作用形式不尽相同，环境条件对载体系统的稳定性影响较大。而且，溶液体系容易分散而形成聚沉现象，造成益生菌的快速释放(突释)而不利于其增殖和利用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于：如何实现控释体系的缓慢释放，提供了一种复合益生菌肠道靶向控释体系及其制备方法，将卵清白蛋白这种水溶性蛋白质和多糖通过层层自组装的方式来构建纳米复合运载体系。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的，本发明的一种复合益生菌肠道靶向控释体系制备方法，包括以下步骤：

(1)益生菌菌种活化：

在无菌的条件下，将多种益生菌的冻干粉菌粉接种到已经灭菌冷却的MRS液体培养基中活化、厌氧培养，分离、弃上清、收集菌体，再用无菌生理盐水洗涤，再次离心弃上清液，收集混合菌悬液；

(2)蓝靛果多糖的制备：

取新鲜的蓝靛果，粉碎后将蓝靛果粉末溶于蒸馏水中，超声浴提，然后加入无水乙醇静置，去除上清液，滤渣用蒸馏水溶解，除蛋白，将沉淀物冷冻干燥即得蓝靛果多糖提取物；

(3)构建多元复合物控释体系：

将干燥的卵清白蛋白溶于蒸馏水中，然后加入果胶溶液，卵清白蛋白与果胶的配比为1：0.5～1，两者混合后将pH调到7，在磁力搅拌的同时将卵清白蛋白与果胶二元复合物：蓝靛果多糖溶液按照体积比2:1逐滴加入蓝靛果多糖溶液，于4℃下过夜以保证充分水合；

(4)益生菌包埋：

将步骤(1)收集到的混合菌悬液用注射器逐滴加入到步骤(3)制备得到的复合物中，在磁力搅拌器下连续搅拌以促使充分混合，然后调pH值为4.6，以得到负载益生菌的控释体系。

所述步骤(1)中，多种益生菌为质量比1：1：1：1：1的长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、酵母菌、乳酸菌。

所述步骤(2)中，蓝靛果多糖的制备具体过程如下：