[发明专利]一种谷氨酸棒状杆菌重组菌、制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种谷氨酸棒状杆菌重组菌，其能解决传统的谷氨酸棒状杆菌的宿主菌外源蛋白表达量较低，限制了其作为外源蛋白表达宿主的应用程度的技术问题。一种谷氨酸棒状杆菌重组菌，其特征在于：谷氨酸棒状杆菌重组菌的NCgl1689基因不能正确地转录或翻译。本发明改造的谷氨酸棒状杆菌重组菌其通过阻断NCgl1689基因的转录和翻译，实现外源蛋白的高表达。

技术领域

本发明涉及一种谷氨酸棒状杆菌重组菌、制备方法和应用。

背景技术

谷氨酸棒杆菌是一种革兰氏阳性土壤微生物，是在上世纪五十年代从日本东京上野动物园的土壤中分离得到。在工业上该菌主要用于各种氨基酸、有机酸、高级醇等小分子的生产。随着基因工程、代谢工程、发酵工程等生物技术的不断进步，对谷氨酸棒杆菌的基因组序列、代谢通路和发酵条件的认识更加深刻。谷氨酸棒杆菌至今发现具有不产内毒素且胞外水解酶活性较低，能够分泌正确折叠的具有生物活性的蛋白质分子等优点。另外谷氨酸棒杆菌的培养技术非常成熟，能够进行大规模菌体发酵。因此谷氨酸棒杆菌可以作为一种优良的宿主用于各种异源蛋白的分泌表达生产。

但传统的谷氨酸棒状杆菌的宿主菌由于外源蛋白表达量较低，限制了其作为外源蛋白表达宿主的应用程度。因此，有必要对谷氨酸棒状杆菌的宿主菌进行改造使其更有利于外源蛋白的表达。

发明内容

本发明提供了一种谷氨酸棒状杆菌重组菌，其能能解决传统的谷氨酸棒状杆菌的宿主菌外源蛋白表达量较低，限制了其作为外源蛋白表达宿主的应用程度的技术问题。

一种谷氨酸棒状杆菌重组菌，其特征在于：所述谷氨酸棒状杆菌重组菌的NCgl1689基因不能正确地转录或翻译。

进一步的，所述谷氨酸棒状杆菌重组菌是由谷氨酸棒状杆菌ATCC13032将NCgl1689基因全部缺失得到，NCgl1689于基因组中所在位置为1858763-1860730，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Gene ID: 1019721。

进一步的，所述谷氨酸棒状杆菌重组菌是由谷氨酸棒状杆菌ATCC13032将NCgl1689基因部分缺失得到，NCgl1689于基因组中所在位置为1858763-1860730。

更进一步的，NCgl1689基因中部分缺失的为AAA结构域，AAA结构域于基因组中所在位置为1859262-1859930。

更进一步的，所述谷氨酸棒状杆菌重组菌于 2018年12月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号为CGMCC 16958 。

本发明还提供了上述谷氨酸棒状杆菌重组菌的制备方法，其特征在于：采用pK18mobsacB同源重组技术敲除谷氨酸棒状杆菌ATCC13032的NCgl1689基因中的AAA结构域，使得获得的谷氨酸棒状杆菌重组菌的NCgl1689基因不能正确地转录或翻译。

本发明还提供了上述谷氨酸棒状杆菌重组菌在制备纳米抗体VHH的应用。

本发明还提供了纳米抗体VHH的表达体系，其包括上述谷氨酸棒状杆菌重组菌，所述谷氨酸棒状杆菌重组菌中转化有分泌组成型pXMJ19-VHH载体，所述分泌组成型pXMJ19-VHH载体的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供了上述谷氨酸棒状杆菌重组菌在制备氨基末端-脑钠肽前体NT-proBNP中的应用。

本发明还提供了氨基末端-脑钠肽前体NT-proBNP的表达体系，其包括上述谷氨酸棒状杆菌重组菌，所述谷氨酸棒状杆菌重组菌中转化有组成型pXMJ19-NT-proBNP载体，所述组成型pXMJ19-NT-proBNP载体的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。