[发明专利]非整倍体产前FISH检测室内质控方法

说明书

本发明涉及产前诊断技术领域，公开了一种非整倍体产前FISH检测室内质控方法，包括以下步骤，步骤1，染色体非整倍体羊水细胞株的构建；步骤2，产前FISH检测室内质控细胞的配制；步骤3，Levey‑Jennings质控图的建立；步骤4，Levey‑Jennings质控图的应用。本发明具有以下优点和效果：首次以SV40LT基因转染的方法构建了可再生利用的常见染色体非整倍体羊水细胞株，制成了与Levey‑Jennings质控图相配套的嵌合体质控细胞，解决了长期受困的产前FISH检测质控物贫乏问题，首创了基于Levey‑Jennings质控图的标准化产前FISH检测室内质控方法，对提高产前FISH检测的准确性具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及产前诊断领域，特别涉及一种非整倍体产前FISH检测室内质控方法。

背景技术

非整倍体即染色体数目异常，发生于生殖细胞则有可能导致不育不孕、自发流产和先天出生缺陷，是最为常见和严重的出生缺陷，常采用无创产前基因检测筛查或染色体核型分析确诊。1992年Ried等首次报道羊水细胞染色体非整倍体的荧光原位杂交(FISH)检测，因FISH检测可弥补细胞培养失败、费时、报告周期长等常规细胞遗传学诊断的不足，因此近年来被广泛地应用于产前诊断。尽管多年来分子遗传学产前诊断的质量控制颇受重视并已成为国内外研究的热点之一，但由于难以从有限的产前诊断病例样本中直接获取可供各实验室批量使用的质控物，也难以进行这类质控物的产业化制备，所以目前染色体非整倍体产前FISH检测仍无法开展规范的室内质控。

发明内容

本发明的目的是提供一种非整倍体产前FISH检测室内质控方法，具有提高产前FISH检测的准确性的效果。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种非整倍体产前FISH检测室内质控方法，包括以下步骤，步骤1，染色体非整倍体羊水细胞株的构建，以SV40LT分别转染非整倍体的多种原代羊水细胞，经筛选和传代，收获多种非整倍体羊水细胞株，冻存备用；步骤2，产前FISH检测室内质控细胞的配制，取非整倍体羊水细胞株，以固定液配成非整倍体细胞悬液，将至少两种非整倍体细胞悬液混合后配成质控细胞；步骤3，Levey-Jennings质控图的建立，将质控细胞在与被测样本在相同的条件下进行FI SH检测，检测质控细胞内各种非整倍体细胞的百分比，检测多个批次，建立FISH检测的Levey-Jennings质控图；步骤4，Levey-Jennings质控图的应用，取质控细胞与每批被测样本在相同的条件下检测，将所得质控细胞的检测数据绘制在Levey-Jennings质控图，判断是否失控。

通过采用上述技术方案，在非整倍体的产前FISH检测中，由于实验试剂、仪器和操作等多种因素均可致FISH检测结果特别是嵌合体检测结果的不准确，所以需要一种与被检测标本同源的病例细胞作为质控细胞，进行实验检测的质量控制。鉴于产前诊断的检测对象几乎都是罕见病，很难从有限的病例中获取可供各实验室批量使用的同源质控物，所以尽管多年来分子遗传学诊断的质控问题颇受重视，但因质控物的来源受限而无法以同源质控物开展FISH的室内质控和室间质评。

SV40LT基因能调节细胞周期中的重要调控点，从而使绝大多数人类细胞永生化，在体外培养350代以上，而且基本保留其原始细胞的分化表型和生物学特性。为了解决产前FISH检测的质控物贫乏问题，本申请以SV40LT基因转染原代羊水细胞的方法构建了具有无限扩增性能的可再生利用的非整倍体羊水细胞株，解决质控物贫乏的问题。

在解决质控物贫乏的问题后，建立理想的质控方法尚需使用高值、中值和低值的质控物，而且在非整倍体产前FISH检测中，最易于产生误诊的是嵌合体的检测，特别是多种核型并存的低比例嵌合体更易误诊。鉴于实际被测样本中常含有嵌合体病例、嵌合体检测易于误诊以及含有不同比例核型的嵌合体质控细胞更能评估检测质量等原因，本申请将至少两种非整倍体细胞悬液配成嵌合体质控细胞，且能按不同比例进行配制，以便能提供与被测样本核型比例较为接近的质控细胞，从而为建立较理想的产前FISH检测的室内质量控制方法奠定基础。