[发明专利]一种基于sp2/0细胞永生化改良的杂交瘤技术在审
| 申请号： | 201910109205.6 | 申请日： | 2019-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN109913500A | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 翁炳焕;杨昊堃 | 申请（专利权）人： | 翁炳焕 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 317300 浙江省台*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 瘤细胞 永生化 细胞永生化 杂交瘤技术 融合细胞 改良 扩增 重组逆转录病毒载体 细胞贴壁生长 阳性克隆细胞 细胞成活率 细胞死亡率 杂交瘤细胞 传代培养 导入杂交 克隆筛选 生物领域 细胞融合 细胞筛选 致病基因 重组载体 融合 产业化 转染 成功率 汇合 | ||
1.一种基于sp2/0细胞永生化改良的杂交瘤技术，其特征在于，将具有hTERT永生化基因的重组逆转录病毒载体转染鼠sp2/0细胞，经PM和HAT筛选获得永生化改良、更适合于体外无限传代和被植入外源基因扩增的质粒包装sp2/0细胞，为产业扩增全致病基因组奠定基础。
2.根据权利要求1所述的一种基于sp2/0细胞永生化改良的杂交瘤技术，其特征在于，所述重组逆转录病毒载体为pcDNA3.1-hTERT。
3.根据权利要求1、2所述的一种基于sp2/0细胞永生化改良的杂交瘤技术，其特征在于，所述逆转录病毒载体包括pCDNA3.1、pCMV、pSV-neo、pEF。
4.根据权利要求1所述的一种基于sp2/0细胞永生化改良的杂交瘤技术，其特征在于，所述包装sp2/0细胞的筛选使用2～4ug/ml PM。
5.根据权利要求1、4所述的一种基于sp2/0细胞永生化改良的杂交瘤技术，其特征在于，所述包装sp2/0细胞的筛选使用3ug/ml PM。
6.根据权利要求1所述的一种基于sp2/0细胞永生化改良的杂交瘤技术，其特征在于，所述PM和HAT筛选指以10%胎牛血清配制同时含HAT和PM的筛选应用液，包括含PM浓度为2µg/ml、HAT浓度为1×的甲液， PM浓度为3µg/ml、HAT浓度为1×的乙液， PM浓度为4µg/ml、HAT浓度为1×的丙液， PM浓度为5µg/ml、HAT浓度为1×的丁液，然后在96孔板的第1和2排、第3和4排、第5和6排、第7和8排中分别以200µl/孔的甲液、乙液、丙液和丁液进行筛选，每5天更换筛选液1次。
7.根据权利要求1所述的一种基于sp2/0细胞永生化改良的杂交瘤技术，其特征在于，所述转染鼠sp2/0细胞指以标准磷酸钙沉淀法转染至对数生长期的鼠sp2/0细胞。
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