[发明专利]能检测多种禽呼吸道病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒

权利要求书

1.能检测多种禽呼吸道病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包括：

（1）预扩增引物混合液；

该混合液中包括预扩增引物，其序列如SEQ ID NO：1～14所示；

（2）探针混合液；

该混合液中包括左侧探针和右侧探针，其序列如SEQ ID NO：15～28所示；

（3）MLPA缓冲液；

（4）连接缓冲液A；

（5）连接缓冲液B；

（6）连接酶Ligase-65；

（7）PCR反应混合液，其包括如序列SEQ ID NO：29和30所示的通用引物；

（8）SALSA聚合酶；

（9）阴性对照；

（10）阳性对照；

在所述预扩增引物混合液的预扩增引物中：序列SEQ ID NO：1和序列SEQ ID NO：2分别是禽流感病毒H9预扩增的正向和反向引物；序列SEQ ID NO：3和序列SEQ ID NO：4分别是禽流感病毒H5预扩增的正向和反向引物；序列SEQ ID NO：5和序列SEQ ID NO：6分别是禽流感病毒H7预扩增的正向和反向引物；序列SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8分别是新城疫病毒预扩增的正向和反向引物；序列SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10分别是禽偏肺病毒预扩增的正向和反向引物；序列SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12分别是禽传染性支气管炎病毒预扩增的正向和反向引物；序列SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14分别是禽传染性喉气管炎病毒预扩增的正向和反向引物；

在所述探针混合液的探针中：序列SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16分别为检测禽流感病毒H9的左侧探针和右侧探针；序列SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18分别为检测禽流感病毒H5的左侧探针和右侧探针；序列SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20分别为检测禽流感病毒H7的左侧探针和右侧探针；序列SEQ ID NO：21和SEQ ID NO ：22分别为检测新城疫病毒的左侧探针和右侧探针；序列SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24分别为检测禽偏肺病毒的左侧探针和右侧探针；序列SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26分别为检测禽传染性支气管炎病毒的左侧探针和右侧探针；序列SEQ ID NO：27和SEQ ID NO：28分别为检测禽传染性喉气管炎病毒的左侧探针和右侧探针；

在所述PCR反应混合液的引物中，序列SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30分别是通用正向和反向引物；

其中，序列SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26和SEQ ID NO：28的5’端进行磷酸化处理；

所述阳性对照是基因体外转录RNA与阳性重组质粒DNA的混合物；其中基因体外转录RNA是指禽流感病毒H9的HA基因、禽流感病毒H5的HA基因、禽流感病毒H7的HA基因、新城疫病毒的M基因、禽偏肺病毒的N基因、禽传染性支气管炎病毒的M基因的体外转录RNA，阳性重组质粒DNA是指禽传染性喉气管炎病毒的糖蛋白C基因的阳性重组质粒DNA。