[发明专利]T细胞特异接头蛋白SLP-76类泛素化的方法及相应的体外高效鉴定有效
申请号: | 201910109404.7 | 申请日: | 2019-02-10 |
公开(公告)号: | CN109777833B | 公开(公告)日: | 2023-03-31 |
发明(设计)人: | 刘合宾;熊伊韦 | 申请(专利权)人: | 西交利物浦大学 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12N15/62;C12N15/66;C07K19/00;G01N33/68 |
代理公司: | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人: | 金祺 |
地址: | 215123 江苏省苏州市苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 细胞 特异 接头 蛋白 slp 76 类泛素化 方法 相应 体外 高效 鉴定 | ||
1. T细胞特异接头蛋白SLP-76类泛素化的方法,其特征在于包括以下步骤:
1)、构建SLP-76-UBC9融合蛋白表达质粒:
将编码SLP-76 蛋白的序列插入 pcDNA3-MCS-Ubc9质粒的多克隆位点内,从而构建SLP-76-UBC9融合表达质粒;
编码SLP-76-UBC9融合蛋白的序列为:
ATGGCACTGAGGAATGTGCCCTTTCGCTCAGAGGTCCTGGGCTGGGACCCCGACAGCCTTGCTGACTATTTCAAGAAGCTCAACTATAAGGACTGTGAGAAGGCAGTGAAGAAGTACCACATCGATGGGGCTCGCTTCTTGAACCTGACAGAAAATGACATCCAGAAGTTCCCCAAGCTCCGGGTGCCGATTCTCAGTAAGTTAAGTCAGGAAATCAACAAGAACGAAGAGAGGAGGAGCATCTTCACACGCAAACCCCAAGTCCCGCGGTTTCCTGAAGAGACAGAAAGCCACGAAGAGGACAATGGGGGCTGGTCGTCCTTTGAAGAAGACGATTATGAAAGTCCCAATGATGACCAGGATGGGGAGGATGATGGAGACTATGAGTCCCCCAATGAGGAGGAAGAGGCACCCGTGGAAGATGACGCGGATTATGAGCCGCCACCCTCCAATGACGAGGAAGCTCTGCAGAACTCCATCCTGCCTGCCAAGCCTTTCCCCAACTCCAACTCCATGTACATCGACCGGCCCCCCTCTGGGAAAACCCCCCAGCAGCCTCCTGTGCCCCCCCAGAGACCGATGGCCGCCCTCCCGCCCCCACCAGCCGGCCGGAATCACTCGCCACTGCCCCCACCCCAGACCAACCACGAAGAACCCAGCAGAAGCAGAAACCACAAAACGGCAAAGCTCCCTGCTCCTTCAATAGACAGAAGCACGAAACCTCCCCTAGATCGTTCATTAGCTCCGTTTGATAGAGAACCCTTCACACTAGGAAAGAAACCACCATTTTCTGACAAGCCCTCGATTCCAGCGGGAAGGTCACTCGGGGAGCATTTACCCAAGATTCAAAAGCCTCCTTTACCACCGACCACGGAAAGACATGAAAGGAGCAGCCCCCTGCCAGGGAAGAAGCCACCTGTGCCAAAGCATGGATGGGGACCAGACAGAAGAGAGAATGATGAAGATGATGTGCATCAGAGACCTTTGCCCCAGCCAGCACTACTTCCTATGAGCTCCAACACTTTCCCTTCAAGATCTACTAAGCCAAGTCCCATGAACCCTCTCCCATCCTCTCACATGCCTGGAGCATTCTCAGAAAGTAACAGCAGTTTTCCACAGAGTGCCTCCCTGCCACCATACTTCTCTCAAGGCCCTAGCAACAGACCACCTATCAGAGCCGAAGGCAGAAACTTCCCCTTGCCACTTCCAAACAAACCTCGGCCCCCATCCCCCGCGGAGGAAGAGAATTCATTAAATGAAGAGTGGTACGTTTCTTATATTACCCGACCAGAGGCAGAAGCTGCTCTTAGA
2)、提供SLP-76羧基端改造质粒;
SLP-76羧基端改造质粒为SLP-76上438-516位氨基酸剔除的UBC9融合蛋白表达质粒;
3)、将步骤2)所得的改造质粒与SUMO1表达质粒在HEK 293T细胞内共表达;得到SLP-76类泛素化修饰蛋白。
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